蛋白质酪氨酸硫酸化(Sulfotyrosine,sY)是一种普遍存在于生物体内的翻译后修饰。多数硫酸化蛋白质会参与蛋白质-蛋白质相互作用(Protein-protein interaction,PPI)从而影响生理功能如止血、白细胞黏附等,其中有部分PPI过程是通过识别酪氨酸上的硫酸根来参与,因此,sY与蛋白生物活性的关系备受关注。当前较普遍采用的策略是通过新戊基(Neopentyl,nP)来对硫酸根进行保护从而防止其在多肽合成中水解,但目前合成的多数硫酸化多肽其序列不含半胱氨酸(Cys)残基,这与其侧链巯基在nP脱除条件下不稳定有关。然而,Cys存在于多数重要生理蛋白/多肽中,因此有必要开发一种更为普适的、含半胱氨酸的硫酸化修饰多肽合成方法来推动相关多肽/蛋白药物的基础研究。芋螺毒素被誉为“海洋药物宝库”,其药用活性已经成为当今国际生物医药领域研究的热点之一。α4/7-芋螺毒素一般由15-22个氨基酸组成且包含4个Cys,因其能特异性阻断神经型乙酰胆碱受体而被认为是极具潜力的神经性疾病药物。此前有研究人员通过质谱手段发现部分α4/7-芋螺毒素存在sY修饰,但由于难以获取均一硫酸化多肽而导致其活性及相关研究并未能顺利开展。在本论文工作中,我们对sY的保护基nP的脱除方法进行了一系列探索,最终得到了其保护基脱除的一般性规律,认为nP在大多数水溶液中均可脱除。我们将该方法应用于8条硫酸化α4/7-芋螺毒素的合成:通过Fmoc-SPPS策略制备得到线性多肽,以分步、选择性的方法对多肽进行定向折叠,在折叠的同时完成nP基团的脱除,实现一锅法高效制备含sY的目标多肽。并且,我们也成功避免了硫酸根在酸性条件下的水解问题,最终利用常规HPLC制备得到含sY修饰的芋螺毒素。通过动物血清实验表明了多肽在血清中具有良好的稳定性且sY修饰不会降低多肽的稳定性。最后,为了探究sY修饰对于芋螺毒素与乙酰胆碱结合蛋白相互作用的影响,我们对乙酰胆碱结合蛋白的重组表达进行了初试,但发现该蛋白在透析复性以及蛋白酶切过程中极易多聚且不可控。总的来说,我们开发了一种高效的含半胱氨酸的硫酸化多肽的合成方法来推动硫酸化多肽/蛋白的合成研究,并为硫酸化修饰多肽/蛋白的药用机理研究打下坚实的基础。