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海洋生物活性肽具有分子量小、生物活性高、副作用小等特点,成为近年来国内外研究的热点。本文主要研究从虾蛄中酶解提取的多肽,对酶解工艺进行优化,并在分离纯化后对多肽的免疫活性进行初步研究,在此基础上将多肽制成胶囊剂并初步建立质量标准,为进一步研究虾蛄免疫活性肽及其功能产品提供理论依据。主要研究成果如下:1.虾蛄的酶解工艺优化实验首先研究了虾蛄免疫多肽的酶解条件,实验以温度、时间、加酶量与酶解pH值为单因素进行了酶解条件的初步探究,以MTT法测定虾蛄酶解上清液对小鼠巨噬细胞细胞活性影响确定合适的单因素水平,利用正交实验表设计试验,优化后得到的酶解条件为:酶解pH值为9.5,酶解时间为8h,酶解温度60℃,加酶量为0.12%。2.虾蛄活性肽的分离纯化将上述实验得到的酶解液利用超滤、Sephadex G-25和RP-HPLC进行分离纯化,并采用小鼠巨噬细胞吞噬实验测定各组分对小鼠巨噬细胞吞噬能力的影响,作为多肽的活性指标。经过第一步超滤后,虾蛄酶解液被分为四个组分OP1、OP2、OP3和OP4,其中组分OP3的免疫活性最高,其质量为5mg/mL时对RAW264.7细胞活性促进率为163%。将OP3经Sephadex G-25进一步纯化后得到组分OPS,将OPS大量收集后经高效液相色谱柱分离纯化,得到四个组分分别为HOP1、HOP2、HOP3和HOP4,分别进行小鼠巨噬细胞吞噬实验,确定活性最高的组分为HOP1。3.OPS的免疫活性研究通过建立三个免疫模型,分别研究OPS单独作用于小鼠巨噬细胞时对细胞因子的影响、在炎症条件下对细胞因子的调节能力、对细胞炎症反应的保护作用。模型以LPS诱导下的小鼠巨噬细胞作为阳性对照组,并设置空白对照组。结果表明OPS单独作用于细胞时会在一定程度内促进细胞释放炎症因子,但可降低LPS刺激下RAW264.7所产生的致炎因子,如iNOS、NO、TNF-α,同时增加抑炎因子IL-10的产生,但OPS对IL-6作用不明显。4.虾蛄免疫活性肽胶囊剂制备基于上述研究,对虾蛄免疫活性肽的硬胶囊制备做出初步探索,以药用淀粉为辅料制备三批样品,依据2010版药典附录质量标准项下的相关要求,初步制订了虾蛄免疫活性肽胶囊剂质量标准,对水分含量、装量差异、崩解时限、微生物限度检查等项目开展了方法验证,结果表明该制备工艺合理可行,为虾蛄免疫活性肽胶囊剂制备生产提供了实验依据。