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目的: 1.比较白癜风患者血清中谷氨酸及胱氨酸含量与健康人的差异,为深入探讨其与该病的关系提供依据。 2.探讨肌球蛋白X对人角质形成细胞伪足的影响。 方法: 1.选取34例白癜风患者为病例组及31例健康人做对照,应用高效液相色谱法测定血清中谷氨酸及胱氨酸含量并进行比较。 2.借助小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)介导的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术,采用MyoX基因siRNA转染处理HaCaT细胞,以RT-PCR的方法在mRNA水平上筛选有效下调MyoX的siRNA序列。 3.根据所筛选出的RNA序列,构建重组慢病毒shRNA载体,即MyoX-GFP-shRNA,同时构建不针对该细胞任何基因的阴性对照序列,即NC-GFP-shRNA。将构建的重组慢病毒转染处理HaCaT细胞,建立稳定的细胞系,采用RT-PCR及Western Blot方法检测转染处理前后HaCaT细胞中MyoX基因的mRNA及蛋白水平的变化。 4.扫描电镜观察MyoX-shRNA转染处理前后HaCaT细胞伪足的形态变化。 5.流式细胞术检测慢病毒转染处理前后HaCaT细胞吞噬微球能力的变化。 6.激光共聚焦显微镜检测慢病毒转染处理前后HaCaT细胞吞噬微球的数量变化。 结果: 1.白癜风患者血清中谷氨酸和胱氨酸水平均有明显的变化,其中谷氨酸水平与对照组相比明显降低,而胱氨酸水平却明显升高,两组差异经统计学检验均有显著性意义(P<0.05)。 2.在不同性别、年龄、期别的白癜风患者血清中谷氨酸及胱氨酸含量均无明显差异(P>0.05)。 3.所设计的Myo X基因重组慢病毒能有效下调Myo X基因mRNA及蛋白表达水平。 4.扫描电镜观察MyoX基因重组慢病毒转染后HaCaT细胞伪足数量减少。 5.流式细胞术检测MyoX基因重组慢病毒转染处理后HaCaT细胞吞噬微球能力降低。 6.共聚焦显微镜检测MyoX基因重组慢病毒转染处理后HaCaT细胞吞噬微球的数量的减少。 结论: 1.白癜风患者谷氨酸及胱氨酸代谢异常,提示应关注其对患者疗效的影响。 2.MyoX影响HaCaT细胞伪足的形成,下调MyoX在HaCaT细胞中的表达,可以减少HaCaT伪足的形成,并能够降低其吞噬功能。