干扰NPRL2表达对前列腺癌细胞体外体内凋亡和侵袭转移的研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liliandidi
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目的:明确 NPRL2在前列腺癌中的表达情况以及其对前列腺癌DU145和PC3细胞体外增殖影响;进一步探究干扰NPRL2表达后对前列腺癌细胞DU145和PC3体外凋亡和侵袭转移的影响及其作用机制;深入探讨干扰NPRL2表达后对前列腺癌细胞DU145和PC3体内侵袭转移的影响及其作用机制的探讨。  方法:  一体外实验:  1.体外凋亡检测:1)使用RT-PCR和Western Blot检测人正常前列腺细胞株RWEP-1和前列腺癌DU145和PC3细胞株中NPRL2的表达量;2)对前列腺癌PC3和DU145细胞株进行慢病毒NPRL2 sh RNA转染,首先,通过荧光法确定转染成功,然后对转染后的DU145和PC3细胞株分别从mRNA及protein水平对NPRL2的表达量进行检测;3)对转染后的DU145和PC3细胞株进行增殖能力检测使用CCK-8法;4)运用流式细胞术对转染后的DU145和PC3进行凋亡和周期的检测;5)运用Hoechst染色对转染后细胞的凋亡进行细胞形态学上的检测6)使用RT-PCR和Western Blot对转染后细胞的凋亡蛋白进行检测;7)使用划痕和Transwell对转染后细胞的侵袭转移能力进行检测;8)使用 Western Blot及 RT–q PCR对 NPRL2及其调控的下游PI3K/AKT/GSK-3β信号通路进行检测;  2.体外侵袭转移的检测:1)运用Transwell和划痕对前列腺癌DU145和PC3细胞的体外侵袭转移进行检测;2)使用Western Blot及RT–qPCR对NPRL2及其下游的NF-κB/MMP-9信号通路进行检测。  二体内实验:  体内实验:检测转染后细胞在体内的成瘤率,及成瘤后肿瘤缩减率;使用HE染色观察瘤体中肿瘤细胞的形态变化;使用免疫荧光检测瘤体中凋亡相关蛋白的变化;使用免疫组化法对瘤体中凋亡相关蛋白表达进行检测;使用Western blot及RT-PCR对NPRL2及凋亡和转移相关蛋白和基因进行检测。  三数据分析:  数据分析:采用 SPSS18.0软件对所有实验数据进行统计学分析。  结果:  1.与正常的前列腺细胞系RWPE–1相比,NPRL2在前列腺癌细胞系DU145和PC3中的表达量明显上升;  2.干扰NPRL2表达后,人前列腺癌细胞DU145和PC3的体外增殖能力明显下降;  3.干扰NPRL2表达后,可以有效抑制人前列腺癌细胞DU145和PC3的凋亡和周期;  4.干扰NPRL2表达后,可以有效抑制人前列腺癌细胞DU145和PC3的凋亡信号通路PI3K/AKT/GSK-3β的表达;  5.干扰NPRL2表达后,可以有效抑制可以有效抑制人前列腺癌细胞DU145和PC3的体外侵袭转移,并对相关通路NF-κB/MMP-9产生影响;  6.体内实验证实,干扰NPRL2表达后,可以有效抑制裸鼠体内的肿瘤转移  结论:NPRL2在前列腺癌细胞DU145和PC3中高表达,干扰NPRL2的表达可以有效降低前列腺癌细胞DU145和PC3的体外增殖,并可以抑制其侵袭和转移,体内实验证实干扰NPRL2的表达可以有效抑制前列腺癌细胞DU145和PC3体内的增殖和侵袭转移。
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