表达1型和3型鸭甲肝病毒VP1基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bingjilin1986
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
鸭病毒性肝炎(Duck Viral Hepatitis,DVH)是一种高度致死性传染病,由鸭甲肝病毒(Duck Hepatitis A Virus,DHAV)引起,其特点为发病急、传播快、病程短、病死率高,主要侵害三周龄以内的雏鸭,给养鸭业造成严重损失。当前DHAV-1和DHAV-3是国内流行的主要血清型,中国内地尚未见分离到DHAV-2的报道。目前鸭病毒性肝炎卵黄抗体和鸭甲型肝炎活疫苗是防治鸭肝炎的主要措施,常规疫苗在防制方面存在一定的不足,因此需要研制更安全、有效的新型疫苗。新城疫(Newcastle Disease,ND)是危害养禽业的重要传染病之一,近年来,新城疫对鸭的危害日趋严重。控制新城疫的主要措施是疫苗接种和严格的生物安全措施,随着反向遗传操作技术的深入发展,新城疫病毒活载体疫苗得到广泛的研究和应用。为了研发一种安全有效的双价苗,本研究以NDV LaSota弱毒疫苗株为载体,构建共表达DHAV 1型和3型VP1基因的重组NDV活疫苗,用于1型、3型鸭病毒性肝炎和鸭新城疫的预防,不仅可以弥补当前DHAV-3疫苗的空白,还可达到一针防多病的效果。本研究主要主要包括以下四部分内容:1.表达鸭肝炎1型和3型VP1基因重组新城疫病毒载体的构建利用Trizol试剂提取DHAV-1和DHAV-3病毒RNA,分别扩增得到DHAV 1VP1-2A和DHAV 3VP1基因。利用SOE PCR方法进行1型和3型鸭甲肝病毒VP1基因的连接,扩增产物DHAV 1VP-2A-3VP1经1%琼脂糖凝胶电泳检测,目的片段约为2368bp,与预期相符。以含有LaSota全长cDNA的重组质粒p LS-RFP(P基因和F基因间插有RFP报告基因)为载体,利用In-Fusion?PCR Cloning Kit将目的基因DHAV 1VP1-2A-3VP1插入到新城疫基因组P基因和F基因间,构建含有1型、3型鸭甲肝病毒VP1基因重组质粒p LS-1VP1-2A-3VP1,进一步PCR检测和序列测定证实DHAV 1VP-2A-3VP1基因正确插入到p LS载体中。2.重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1的拯救为了从克隆的cDNA中拯救感染性NDV,将重组质粒pLS-1VP1-2A-3VP1与表达NDV NP、P、L蛋白的辅助质粒共转染HEp-2细胞。收获转染细胞上清接种于10日龄SPF鸡胚,在鸡胚中连续传代。将拯救病毒命名为rLS-1VP1-2A-3VP1,并通过HA、RT-PCR、IFA等试验进行鉴定。鉴定结果表明,重组病毒r LS-1VP1-2A-3VP1被成功拯救。3.重组病毒的生物学特性测定通过重组病毒株r LS-1VP1-2A-3VP1对鸡胚的半数感染量(EID50)、平均鸡胚致死时间(MDT)、1日龄SPF鸡脑内致病指数(ICPI)、6周龄SPF鸡静脉内致病指数(IVPI)和生长曲线的测定,结果表明重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1成功拯救出并保持了原重组疫苗株rLS-RFP对鸡胚的高滴度生长适应和低致病的特性。4.种鸭免疫试验本研究选用种鸭进行免疫试验,通过种鸭的多次免疫保证雏鸭有较高的母源抗体,能安全渡过危险期。雏鸭免疫效果有待进一步证实。将E5代重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1(病毒毒价107.2EID50/0.1mL)经点眼滴鼻免疫4月龄种鸭,每羽1mL,初次免疫10天后采血,采用固定病毒-稀释血清法做血清中和试验,重组病毒免疫种鸭血清中DHAV-1和DHAV-3抗体平均效价分别为1:18.17和1:16.60,表明该重组毒可诱导种鸭产生相应的中和抗体。利用Western blot进一步验证重组病毒r LS-1VP1-2A-3VP1免疫种鸭血清能和DHAV-1和DHAV-3 VP1表达蛋白发生较强的反应。以上结果表明重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1具有作为用于种鸭免疫的鸭肝炎重组病毒活载体疫苗的潜力。
其他文献
摘 要: 语言与文化紧密地结合在一起。在当今全球一体化的背景下,要提高外语学习者的跨文化交际能力,在二外教学中也应该强化文化导入的原则。本文鉴于英语专业二外日语教学中文化要素导入的重要性和必要性,着重探讨了文化要素导入策略问题。  关键词: 二外日语 文化要素 导入策略    外语教学中不仅要教授语言知识,更要重视学习者语言运用能力的培养。这已成为外语学界,特别是专业外语教育的共识。这里的语言运用
摘 要: 在大学英语教学中运用英文歌曲来激发学生的学习兴趣,调动学生的学习积极性是提高英语课堂教学质量的重要手段。在大学英语课堂中运用英文歌曲教学的方式多种多样,正确地运用英文歌曲可以很好地提高学生的英语学习兴趣,同时也可以提高他们的听、说、读、写、译的能力。  关键词: 英文歌曲 大学英语教学 学习兴趣 实际运用    “兴趣是最好的老师”。如今,对于一个非英语专业的大学生来说,能不能学好英语的
The current work investigated the neural correlates of visual perceptual learning in grating orientation discrimination by recording event-related potentials (E
猪传染性胃肠炎(Porcine transmissible gastroenteritis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起的一种以一周龄以下仔猪呕吐、
摘 要: 中西方在文化上存在着很大的差异,在国家和国家之间交流日益增加的今天,文化差异也随之变得越来越明显,越来越重要。因此,在高职英语教学中,教师只有充分认识到中西方文化的差异,运用不同的教学方法和教学手段,将其融入英语教学中,让文化差异与教学很好地结合,让课堂变得多姿多彩,这样才会让学生对英语语言的应用及相关文化知识有一个更深刻的理解和掌握,才会符合高职的培养目标,培养出综合素质更强、上手能力
构建北京油鸡cDNA文库对于北京油鸡遗传资源的保护以及其基因功能的研究具有重要意义。本实验取北京油鸡肝脏组织,提取总RNA,运用SMARTTM技术构建了北京油鸡肝脏组织cDNA文库
摘 要: 语料库语言学是根据语料库提供素材进行语言研究的一门新兴学科。它对英语教学产生了很大的影响,在教学大纲制定、教材编写及课堂教学方面得到了广泛的应用。 本文介绍了语料库语言学及其对英语教学的影响, 包括英语教学观念的转变、对语域变体更清楚地认识、目的语与母语的兼顾、以及对英语学习者的帮助作用等。  关键词: 语料库语言学 英语语料库 英语教学    1.引言    语料库(Corpus),是
连续加压过滤机是荷兰阿尔克马尔的阿马过滤机公司生产的一种新结构的加压过滤机,其过滤压力可达6巴。新设计的KDF型连续加压过滤机的处理能力大,可以得到低水分的滤饼。一
钨在地壳中并不是一种稀有元素,甚至像铜一样丰富。目前,全世界至少有25个国家生产钨精矿。中国是产钨的头号大国,1986年,其产量及储量分别占世界总最的33%及35%。加拿大的
期刊
摘 要: 本文主要通过对二语习得中句子歧义的处理,论述了在二语习得中句子的处理方法、原则、作出决策的策略,以及处理句子的三大模型。  关键词: 句子处理 外语教学 原则 策略 三大模型    每天我们都会听到成千上万的句子,可对其中的大部分句子,我们几乎都没有注意其结构就作了回应,有些句子晦涩难解其意,还有些句子意思清楚但意图模糊。理解一个句子涉及句法、语义和语用因素,以一个简单的主动陈述句为例: