【摘 要】
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目的:探讨臭氧预处理对HL-7702肝细胞缺氧/复氧损伤的影响及其机制。方法:1.使用低氧工作站建立体外肝细胞缺氧/复氧模型,模拟人体肝脏缺血再灌注损伤。将HL-7702肝细胞分为正常对照组（Control组）,缺氧/复氧组（H/R组）,缺氧/复氧+空气预处理组（H/R+AIR组）,缺氧/复氧+20μg/m L臭氧预处理组（H/R+OP20组）,缺氧/复氧+50μg/m L臭氧预处理组（H/R+O
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目的:探讨臭氧预处理对HL-7702肝细胞缺氧/复氧损伤的影响及其机制。方法:1.使用低氧工作站建立体外肝细胞缺氧/复氧模型,模拟人体肝脏缺血再灌注损伤。将HL-7702肝细胞分为正常对照组（Control组）,缺氧/复氧组（H/R组）,缺氧/复氧+空气预处理组（H/R+AIR组）,缺氧/复氧+20μg/m L臭氧预处理组（H/R+OP20组）,缺氧/复氧+50μg/m L臭氧预处理组（H/R+OP50组）,缺氧/复氧+80μg/m L臭氧预处理组（H/R+OP80组）,缺氧/复氧+50μg/m L臭氧预处理+HSP70抑制剂组（H/R+OP50+Q25组）。采用CCK-8检测法检测HL-7702细胞存活率,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。与Control组相比,H/R组细胞存活率下降超过40%作为肝细胞缺氧/复氧模型制备成功的标准。2.为检测臭氧预处理对HL-7702细胞缺氧/复氧后氧化应激的作用,使用比色法检测Control组,H/R组,H/R+OP50组中SOD活性、MDA含量及LDH活性。3.采用Western Blot和RT-q PCR检测Control组,H/R组,H/R+OP50组,H/R+OP50+Q25组中的HSP70蛋白和HSP70 mRNA的表达情况。结果:1.臭氧预处理对HL-7702细胞缺氧/复氧后细胞存活率的影响与Control组相比,H/R组的细胞存活率降低（P40%,肝细胞缺氧/复氧模型建立成功;与H/R组相比较,20、50、80μg/m L臭氧预处理组细胞存活率均增加（P<0.05）;三个不同浓度臭氧预处理组中,H/R+OP50组的细胞存活率较其他两组高（P<0.05）;H/R+OP50组加入HSP70抑制剂后细胞存活率降低（P<0.05）。2.臭氧预处理对HL-7702细胞缺氧/复氧后细胞凋亡率的影响与H/R组相比较,20、50、80μg/m L臭氧预处理均可降低缺氧/复氧后HL-7702细胞的凋亡率（P<0.05）;三个不同浓度臭氧预处理组中,H/R+OP50组细胞凋亡率较其他两组细胞凋亡率低（P<0.05）;H/R+OP50组加入HSP70抑制剂后细胞凋亡率升高（P<0.05）。3.臭氧预处理对HL-7702细胞缺氧/复氧后氧化应激状态的影响与H/R组相比较,H/R+OP50组可降低HL-7702细胞缺氧/复氧后细胞内MDA含量,增强SOD活性,减少LDH泄漏（P<0.05）;而H/R+OP50组中加入HSP70抑制剂后,MDA含量增加,SOD活性降低,LDH泄漏增加（P<0.05）。4.臭氧预处理对HL-7702细胞缺氧/复氧后HSP70表达的影响与H/R组相比较,H/R+OP50组可增加HL-7702细胞HSP70蛋白的表达（P<0.05）;使用槲皮素可抑制臭氧预处理诱导的HSP70表达（P<0.05）。5.臭氧预处理对HL-7702细胞缺氧/复氧后HSP70 mRNA表达的影响与H/R组相比较,H/R+OP50组细胞的HSP70 mRNA表达增多（P<0.05）结论:臭氧预处理能减轻HL-7702细胞缺氧/复氧后损伤,其保护机制可能是通过上调热休克蛋白70的转录和表达,抑制细胞凋亡和降低细胞氧化应激作用。
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