乙型肝炎病毒（HBV）感染致肝细胞损伤机制，很大程度上与病毒蛋白和肝细胞蛋白间的相互作用相关。因此，研究HBV各抗原成分与肝细胞内的蛋白相互作用及其机理能在一定程度上对HBV的致病机制做出解释，为寻找有效防治HBV的方法提供新线索。 酵母双杂交技术是一种研究蛋白-蛋白间相互作用的比较快速、可靠并可大规模筛选的方法。本实验所采用酵母双杂交系统-3，利用两种单倍体酵母a和α接合型可以配合形成二倍体，而其中表达的外源蛋白仍能相互作用，免去了低效率文库质粒与诱饵质粒共转染的问题，大大提高了杂交效率；在原技术基础上增加了3个报告基因，降低了假阳性率，保证实验结果的真阳性率达95％。我们利用该技术，根据HBV ayw亚型的基因全序设计引物，多聚酶链反应（PCR）方法扩增所得到前-S2、HBeAg、HBcAg、HBxAg等基因编码序列，经测序鉴定正确分别连接入酵母表达载体pGBKT7中构建“诱饵”质粒，转化酵母细胞AH109（a型）并在其内表达，Western-blotting验证。然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的乙型肝炎病毒相互作用蛋白的克隆化鉴定及新基因功能的初步研究2－103酵母细胞Y187（a型）进行配合，经营养缺陷和蓝白斑双重筛选，获得HBeAg结合蛋白的真阳性菌落39个、前S 结合蛋白的菌落26个，HBCAg结合蛋白的 16个，HBXAg结合蛋白的 41个。提取阳性酵母菌落的质粒电穿孔法转化大肠杆菌，接种在氨苦青霉素．LB平板上选择并测序，结果在GenBank中进行生物信息学分析，发现其中未知功能的新基因有13个，已知蛋白基因若干。 为进一步确证经酵母双杂交技术筛选出的结合蛋白与诱饵蛋白间在体外也有相互作用，我们根据Genbank中提供的序列信息设计引物，以HepGZ细胞的mRNA为模板，逆转录RT干CR扩增出金属硫蛋白基因及部分新基因的全序列，DNA测序鉴定后，经相应的限制性酶切后克隆入酵母表达载体PGADT7，在TNT网织红细胞裂解物体外翻译，掺入同位素”S，与相应的“诱饵”蛋白进行体外免疫共沉淀反应，经SDS－PAGE电泳，－20oC条件下放射自显影，再次证实上述蛋白间结合作用的可靠性。 在新基因功能的研究方面，我们对HBCAg结合蛋白新基因C上进行了初步探讨。首先明确它的亚细胞定位主要在细胞浆，在哺乳动物细胞内表达对细胞的生长繁殖无明显的影响。通过对它在肝细胞中相互作用蛋白及HrpGZ细胞基因表达谱芯片的研究，推测Cl新基因可能在细胞中起着多种复杂作用，可通过多种途径对许多类型基因表达进行调控或影响。