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前言 现代科学研究证明，内皮细胞(endothelial cell，CE)的生长是恶性肿瘤中生理和病理性血管发生过程的基本前提，血管发生在实体性肿瘤的生长和转移过程中起到一个很重要的作用，在促进EC生长的因子中血小板衍生的内皮细胞生长因子(platelet-derived endothelial cell growth facfor，PD-ECGF)发现较晚，是这个血管发生研究领域中一个相对的新成员。它与胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase，TP)的氨基酸序列一致，目前认为PD-ECGF和TP可相互替换使用。PD-ECGF／TP具有趋化内皮细胞及血管生成作用，通过对不同人类肿瘤的组织学分析，人们已发现PD-ECGF／TP与肿瘤的微血管密度(MVD)相关，在肿瘤的生长、侵袭和转移中发挥重要作用。膀胱移行细胞癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，近年来发病率呈明显增高趋势，对其发病机制、临床生物学特性及有效治疗方法的研究已经成为当前极为重要的课题。本文用免疫组织化学方法评价了PD-ECGF／TP在原发性膀胱移行细胞癌中的表达，揭示了其在原发性膀胱移行细胞癌中的表达与其它临床病理参数包括病理分级、临床分期、MVD及p27蛋白表达之间的关系。 实验材料 一、标本选择 标本来源于中国医科大学第一临床医院泌尿外科2001年1月-2002年4月期间原发性膀胱移行细胞癌组织石蜡包埋标本72例，全部标本均经病理科医生复查证实诊断。其中男性61例，女性 11例，年龄 30－84岁（平均 61．6岁人肿瘤细胞分级按WHO标准，G；级15例，G。级30例，G。级27例。临床分期按UICC－TNM标准，浅表性膀航癌门一T；乃8例，浸润性膀肤癌L－T．）44例。5例正常膀脱粘膜取自前列腺增生开放手术患者正常膀脱粘膜组织。所有标本均常规连续切片，厚度为sop。 二、主要试剂 均购自福州 Maxim Biotech Inc，包括：鼠抗人PD—ECGF单克隆抗体，鼠抗人第皿因子相关抗原单克隆抗体，鼠抗人纠蛋白单克隆抗体，S－P试剂盒，DAB显色剂。 实验方法 一sE染色：所有切片均作y染色。 二、采用免疫组织化学S—P法进行组织染色： 石蜡切片常规二甲苯脱蜡，酒精冲洗水化，PBS洗净1次，3％过氧化氢K液）温箱中 30分钟。PBS洗净 3 X 3分钟，高压抗原修复。室温于自来水中冷却20－30分钟，每张切片加 1滴动物非免疫血清p液人温箱37℃孵育30分钟。甩去B液，每张切片加1滴一抗，4t过液。PBS冲洗3 X 5分钟，每张切片加二滴二抗＊液X温箱 37T孵育 30分钟。PBS冲洗 3 X 5分钟，每张切片加二滴 S－P复合物出液厂温箱 37℃孵育 30分钟。PBS冲洗 3 X 5分钟。DAB显色。自来水冲洗，苏木素复染。梯度酒精干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。 三、对照 1．阴性对照：正常膀脱粘膜组织标本及PBS代替一抗的肿瘤组织标本作阴性对照。 2．阳性对照：已订购的阳性对照片。 四、结果判定 ·2· 二．PD－ECGF’’／TP表达的判定：根据细胞染色强度和染色细胞所占面积两者积分之和来判定。染色强度积分为：不染色一0，轻度染色（淡黄）习，中度染色（棕黄）＝＝2，强染色（深棕黄）＝＝3；染色面积积分为：无细胞染色一0，＜25％细胞染色。1，25－50％细胞染色一2，＞50％细胞染色一3。若两种积分之和＞2为＊D－ECGF／TP表达阳性，SZ则为表达阴性。 2．MVD表达的判定：微血管内皮细胞浆呈棕黄色。每张切片选择三个血管密度最高区域，在400倍下分别进行计数，求其平均值即为该肿瘤的 M侧值。MVD＞20／HP为高度表达，MVD ＜ 20／HP为低度表达。 3．P27蛋白表达的判定：p27蛋白染色阳性表现为细胞核染成棕黄色。每张切片随机取 3个高倍视野（X 400L计数其阳性细胞，用标计指数（LI）表达，即LI一阳性细胞数计数细胞数X100％，并以其三者的平均值作为该肿瘤的 p27LI。p27LI＞50％为高度表达，25－50％为中度表达，＜25％为低度表达。 五、统计学处理：在原发性膀眈移行细胞癌中，PD－ECGF／TP、MVD昨7蛋白表达与病理分级＊ 床分期的关系及 PD－ECGF／TP表达与MVD、P27蛋白表达的关系均采用 X经验，相关系数用Pearson系数。 实验结果 一JD—ECGF／TP、MVDI27蛋白表达与原发性膀既移行细胞癌病理分级、临床分期关系 PD－ECGF／TP阳性23例，阳性表达率为 31．9％，其阳性与阴性表达在肿瘤病理分级间有显著性差异h＜0．05人随病理分级升高其阳性表达增高，Pe——见系数为0．3220，在临床分期间无显著性差异h＞0．05人 MVD高度表达 38例，占总数 52．8％；低 ·3·度 34例，占总数 47．2％，其表达程度在肿瘤病理分级间有显著性差异师＜0．01X随病理分级升高其表达强度增高，PnOO系数为0．3624，在临床分期间无显著性差异师＞0．05人 P27蛋白高度表达24例，占总数33．3％；中度22例，占总数30．6％；低度26例，占总数 36．1％，其表达程度