【摘 要】
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本文以具有血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制活性的德氏乳杆菌（Lactobacillus delbrueckii）QS306为研究对象,检测其在发酵48 h发酵乳中的ACE抑制率为54.50±1.06%,对菌株QS306产生降血压肽蛋白酶的发酵条件和酶提取条件进行优化,并对所提取的酶进行分离纯化及鉴定,再对酶的水解乳蛋白产生ACE抑制活性特点
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本文以具有血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制活性的德氏乳杆菌（Lactobacillus delbrueckii）QS306为研究对象,检测其在发酵48 h发酵乳中的ACE抑制率为54.50±1.06%,对菌株QS306产生降血压肽蛋白酶的发酵条件和酶提取条件进行优化,并对所提取的酶进行分离纯化及鉴定,再对酶的水解乳蛋白产生ACE抑制活性特点以及酶学特性进行研究。结论如下:（1）以发酵时间、初始p H和发酵温度为变量,通过单因素和正交试验,确定菌株QS306产降血压肽蛋白酶的最优发酵条件为:发酵时间16 h,初始p H为7.0,发酵温度为37℃,在此条件下酶活性为5.77±0.05 U/m L。以溶菌酶添加量、裂解温度和裂解时长为变量,通过单因素和正交试验,确定对蛋白酶提取的最优的条件为:溶菌酶添加量为2 mg/m L,裂解温度为53℃,裂解时长为4.5 h,在此条件下酶活性为8.40±0.05 U/m L,离心取得上清液即为粗酶液。（2）通过超滤浓缩及Sephadex G-75凝胶层析对粗酶液进行分离纯化,其比活力可达到109.02±5.46 U/mg,纯化倍数为3.74。用纯化后的蛋白酶水解牛乳蛋白,得到31.50±3.38%的ACE抑制率。经SDS-PAGE检测结果得到了4条条带,分子量分别约为90 k Da、70 k Da、40 k Da和30 k Da。利用胶内酶切技术进行LC-MS/MS蛋白质组学鉴定结果,共鉴定到791个蛋白,5132个多肽,参与菌株QS306的蛋白酶20个。（3）纯化后的德氏乳杆菌QS306产降血压肽蛋白酶米氏常数（Km）为2.78 m M,最大反应速度（Vmax）为0.636。以Me Osuc-Arg-Pro-Tyr-p NA（MS-Arg）作为专一底物,得到蛋白酶在温度为42℃,p H为6.0时活性最高。K+、Fe3+、Ba2+和Cu2+能够激活蛋白酶的活性,Mg2+、Ca2+能够抑制蛋白酶的活性。同时,EDTA能够抑制蛋白酶的活性,说明该蛋白酶的活性中心构象与金属离子有关。
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