球孢白僵菌是一种重要的致病性真菌,已被开发成为一种环境友好型的生物杀虫剂,用于多种农业害虫的防治。然而,在生产实践中,球孢白僵菌的接受度并不高,市场占有率较低。造成这一现象的主要原因是球孢白僵菌杀虫速度缓慢、防治效果不稳定。为了解决这一问题,一些研究者尝试通过遗传改造的方法提高球孢白僵菌的毒力,从而使其能更好地应用于生产实践。本研究中,在确定我们研究的球孢白僵菌菌株也是通过抑制酚氧化酶原激活反应等方式来抑制宿主昆虫免疫系统的基础上,我们用农杆菌介导转化的方法,将一种茧蜂多分DNA病毒(Microplitis demolitor bracovirus)携带的酚氧化酶抑制因子-Egf1.0转入到野生型球孢白僵菌中,获得了一株高表达Egf1.0的基因工程菌株,并对它的杀虫效果和生长性状进行了观察。主要研究结果如下:1、检测了球孢白僵菌对棉铃虫免疫反应的影响,结果表明棉铃虫感染球孢白僵菌后,酚氧化酶原激活反应被抑制,浆细胞的延展能力也受到了抑制。2、原核表达Egf1.0,获得了重组蛋白。蛋白体外功能分析表明Egf1.0蛋白能抑制棉铃虫酚氧化酶原激活反应。3、以pCAMBIA1300质粒为骨架质粒,构建了适用于球孢白僵菌遗传转化的双元表达载体pCAMBIA1300-BAR。4、将Egf1.0基因的信号肽序列替换为球孢白僵菌几丁质酶基因的信号肽序列,人工合成这一融合基因。将该融合基因插入到pCAMBIA1300-BAR载体中,通过农杆菌介导法转入到球孢白僵菌中,经筛选及PCR和Western-blotting分析,获得了Egf1.0-1转化菌株。5、分析了 Egf1.0-1菌株对棉铃虫酚氧化酶原激活反应的影响。结果表明,与野生型相比,Egf1.0-1菌株能更大程度上地抑制棉铃虫酚氧化酶原激活反应。6、毒力分析显示,与野生型相比,Egf1.0-1菌株感染棉铃虫后,半数致死浓度降低了 62.43%,半数致死时间缩短了 24.33h。这一结果表明,在球孢白僵菌中高表达Egf1.0能显著提高该菌的毒力。7、分析了 Egf1.0-1菌株的生长情况。结果显示,与野生型相比,转基因菌株的生长速率、产孢率、孢子发芽率没有显著差异。这一结果表明Egf1.0-1菌株中高表达Egf1.0不会影响真菌的生长。综上所述,本研究将酚氧化酶抑制因子Egf1.0基因导入球孢白僵菌中,使其能够更大程度上地抑制宿主昆虫的酚氧化酶原激活反应,从而提高了球孢白僵菌的毒力。这一研究结果为球孢白僵菌在生物防治中的应用提供了参考资料。