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目的:观察大麻二醇(CBD)对高糖条件下人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,并初步探讨其机制。方法:体外培养HRCECs并分为6组:P0组(空白对照):仅加入等体培养基;P1组(溶剂对照组):加入0.5%乙醇作为溶剂对照;P2组(低糖对照组)+0.5%乙醇:葡萄糖的浓度为5.5mmol/l+0.5%乙醇;P3组(高糖对照组):葡萄糖浓度为22mmol/l+0.5%乙醇;P4组:P3+1μmol/l CBD;P5组:P3+10μmol/l CBD。CBD处理结束后,采用MTT检测细胞增殖变化;实时定量PCR和Western blot分别检测VEGF mRNA和蛋白的表达。同时采用Western blot检测核转录因子FOXO3a磷酸化以及FOXM1蛋白表达,并采用免疫荧光检测FOXO3a的核转位。最后采用染色质共沉淀技术检测FOXO3a和FOXM1与VEGF启动子区域的结合。结果:1.MTT结果显示,在相同的时间点,高糖组细胞增值率明显高于低糖组和对照组,分别加入1μmol/L和10μmol/L CBD处理后,与高糖组相比,细胞活性明显降低。差异有统计学意义。2.P1溶剂对照组和P2低糖组细胞VEGF mRNA表达无明显变化;而P3高糖组VEGF mRNA表达明显增高。给予CBD处理后,P4和P5组VEGF表达水平明显降低。此外,Western blot结果也显示VEGF蛋白表达水平与mRNA类似。3.Western blot结果显示,P0空白组和P1溶剂对照组细胞中FOXO3a第253位丝氨酸(Ser253)磷酸化水平较低,P2低糖组和10P3高糖组均有不同程度的增高。而加入1μmol/L和10μmol/L CBD后,Ser253磷酸化水平随之减少。免疫荧光结果也显示,P0组细胞中FOXO3a主要在细胞核中表达,而在高糖和低糖条件下,细胞核中FOXO3a含量有所减少,而细胞浆中FOXO3a明显增多。给予CBD处理后,进一步促进FOXO3a转位至细胞核内。此外,CBD作用后,FOXM1蛋白表达水平明显降低。4.染色质共沉淀结果显示,P0组中FOXO3a和VEGF的结合水平较高,高糖条件下FOXO3a和VEGF的结合水平低于P0组,而经不同浓度CBD处理后,FOXO3a-DNA复合体的水平明显增多。与FOXO3a相反,CBD处理后,FOXM1-DNA复合体的水平明显低于高糖处理组。结论:1.大麻二醇可抑制高糖条件下视网膜微血管内皮细胞增殖;2.大麻二醇影响核转录因子FOXO3a和FOXM1与VEGF启动子结合,最终抑制VEGF表达。