小鼠胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)是一种来源于3.5天囊胚内细胞团(inner cell mass,ICM)的多能性干细胞,具有无限自我更新能力。自从1981年第一次建立小鼠ESCs以来,ESCs体外培养体系一直是科学研究的热点之一。2008年科研人员开发化学成分明确的2i/LIF(Mek1/2和Gsk3b的抑制剂,简称2i;LIF:白血病抑制因子)培养体系。该培养体系主要通过调节经典的WNT、FGF/ERK和JAK/STAT3等信号通路来维持小鼠ESCs的na?ve多能性,但是这三种小因子中的某一种成分可以维持小鼠ESCs的自我更新和na?ve多能性并不清楚。在这里,我们主要研究应用LIF能否建立L-ESCs细胞系,并鉴定其细胞的特性。首先在2i/LIF培养体系中去掉2i,观察单独使用LIF能否维持小鼠ESCs多能性,其次建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系,我们将其命名为L-ESCs,对其细胞特性、多能性、体外分化和体内发育潜能等方面进行鉴定。实验结果如下:1.建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系本实验用LIF培养体系对6种2i/LIF培养的ESCs(2i/L-ESCs)进行16次诱导,均成功建立L-ESCs细胞系。而且,L-ESCs的形态学特征和单细胞形成克隆能力均与2i/L-ESCs相似。2.L-ESCs的多能性鉴定通过碱性磷酸酶染色、实时荧光定量PCR和免疫荧光染色等一系列实验,鉴定L-ESCs具有与2i/L-ESCs相似的多能性特征,部分细胞保留有2-cell胚胎时期的特征;更重要的是,核型分析发现,与2i/L-ESCs相比,L-ESCs的染色体组成更为稳定。3.L-ESCs的体外分化和体内发育潜能鉴定L-ESCs具有体外分化为中胚层、内胚层和外胚层的能力,并且分子检测发现具有较强的三胚层标记基因和蛋白质表达;在体内发育潜能上,L-ESCs能形成畸胎瘤、可贡献E13.5胎儿及其生殖嵴。综上所述,只添加LIF培养体系能够维持小鼠ESCs的自我更新和多能性及体内发育能力。该研究及进一步对L-ESCs的重组机制及后天修饰的研究,为未来ESCs的临床应用会提供一个很好的理论与技术支撑。