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背景和目的:博尔纳病病毒(Borna Disease Virus,BDV)是一种嗜神经性、单股负链RNA病毒,其宿主可能包括马和羊等所有温血动物。目前研究表明BDV感染可能与人类神经精神疾病相关,但确切关系和发病机制不清,一直是近年来研究的焦点之一。BDV磷蛋白(phosphoprotein, P24)在感染动物的脑组织中含量丰富,是BDV核糖核蛋白体的中心蛋白,在病毒感染过程中发挥重要作用。本研究通过建立持续表达BDV P24的细胞模型,初步探讨BDV P24对PC-12细胞增殖和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达的影响,为进一步研究BDV的致病机制提供依据。方法:1.用阳离子脂质体方法将含有BDV P24基因的真核表达质粒pEGFP-N1-P24转染到神经源性的PC-12细胞中,经G418筛选得到稳定表达细胞模型,用荧光显微镜和RT-PCR鉴定BDV P24在PC-12细胞内的表达。2.观察转染pEGFP-N1-P24的细胞与转染pEGFP-N1空质粒对照和未转染细胞的形态学变化,用MTT检测上述各组细胞增殖活性的变化,用免疫荧光和Fluorescent real-time PCR的方法检测TH在各组细胞中的表达。结果:1.成功建立持续表达BDV P24的细胞模型。用荧光显微镜观察可见BDV P24主要表达在细胞核内;PCR结果显示只有稳定转染pEGFP-N1-P24的细胞转录BDV P24片段,转染pEGFP-N1空质粒的细胞和未转染的细胞内均没有。2. BDV P24抑制PC-12细胞的增殖。用MTT的方法检测三组细胞的增殖活性,结果显示转染pEGFP-N1-P24的细胞增殖活性最差,其次为转染pEGFP-N1空质粒的细胞,而未转染的细胞增殖活性不受影响,差异具有统计学意义。3. BDV P24促进TH的表达。用免疫荧光和real-time PCR的方法检测TH的表达,结果一致显示TH在转染pEGFP-N1-P24的细胞中表达量最多,在转染pEGFP-N1空质粒的细胞中表达量最少。结论:用阳离子脂质体的方法成功建立了持续表达BDV P24的细胞模型。BDV P24不改变PC-12细胞的形态,明显抑制细胞的增殖,促进细胞内TH的表达。上述现象可为BDV感染上调宿主体内单胺能系统功能,从而引起运动障碍、反应过激和社会能力下降等表现提供依据。