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Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)是多细胞生物体内参与固有免疫的一类重要模式识别受体,联系着生物体的非特异性免疫和特异性免疫功能。本研究首次克隆并报道了含有鸭TLR21基因完整编码框的cDNA序列,并进行了相关研究。主要内容如下:1鸭TLR21基因的分子克隆、序列分析及组织表达谱检测利用PCR和RACE技术,根据禽类TLR21基因序列设计引物,成功克隆了鸭TLR21基因,并将此长为3009 bp的cDNA序列提交至NCBI(GenBank登录号:KY829021)。鸭TLR21基因序列包含一个长为2931 bp的开放阅读框,编码976个氨基酸,氨基酸序列对比显示与鹅TLR21相似度最高,达92%;其次是鸡TLR21,相似度为76%;鸭TLR21与鳄鱼和蝾螈的TLR21氨基酸序列相似度高于鱼类TLR21;与人TLR9相似度仅为28%。预测的鸭TLR21二级结构显示其具有典型的TLR结构,包括信号肽、胞外区、跨膜区和胞内区;三级结构预测结果显示鸭TLR21或以单体形式存在,或以受体-配体的对称二聚体形式存在。鸭TLR21的组织分布规律显示鸭TLR21广泛存在于鸭各组织器官中,在免疫相关组织如外周血、脾、法氏囊、盲肠和哈德氏腺中有较高表达。2鸭TLR21的免疫学活性检测用双荧光素酶报告基因检测了TLR21是否可以识别CpG-ODN并激活其下游的NF-κB,结果显示CpG-ODN确实可以通过TLR21激活NF-κB。利用qRT-PCR方法检测5种免疫刺激剂处理的DEFs中相关基因的表达发现:3种不同的CpG-ODN均能上调TLR21的表达,其中CpG-ODN 2395和CpG-ODN 2007免疫刺激作用比CpG-ODN HC4040强,而LPS和Poly(I:C)刺激不能改变TLR21的mRNA表达水平。同时,三种CpG-ODN也都使通路下游免疫因子IL-1β、IL-6和IFN-α表达升高;敲低TLR21后,CpG-ODN刺激IL-1β、IL-6和IFN-α的表达水平显著降低。随后以qRT-PCR方法检测了DPV感染的DEFs或雏鸭的脾脏、法氏囊中TLR21及相关因子的表达变化,结果显示:DPV感染DEFs后,细胞中TLR21和IFN-α在24 h和48 h时表达上调,但IL-1β和IL-6在两个时间点的表达均无显著性变化;雏鸭的脾脏中TLR21和IFN-α在感染后第2、3、4 d表达上调,IL-1β在三个时间点的表达均无显著性变化,IL-6在感染后第3、4 d表达上调;法氏囊中TLR21、IL-1β、IL-6和IFN-α在感染后第2、3、4 d的表达均上调。为探究鸭TLR21对DPV复制的影响,用DPV感染过表达鸭TLR21的DEFs,通过qRT-PCR方法对DPV增殖的必须基因UL30进行拷贝数检测,结果显示过表达鸭TLR21可以显著抑制DPV的复制,而在敲低内源性鸭TLR21的DEFs中,DPV的拷贝数显著增加。