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目的目前肝脏移植已成为治疗各种终末期肝病的主要手段,由于供肝的严重短缺,越来越多的心脏死亡供肝（Donation after circulatory death,DCD）应用于临床。但是,对于经历了较长热缺血时间的DCD供肝而言,肝移植术后原发性移植肝无功能（Primary graft nonfunction,PNF）、移植物功能延迟恢复（Delayed graft function,DGF）和缺血性胆管损伤（Ischemic-type biliary lesions,ITBL）的发生率均明显增加,移植物存活率降低,目前常用的单纯低温保存方法已不能满足临床需求。常温机械灌注（Normothermic machine perfusion,NMP）可模拟供肝的生理条件,在常温状态下维持细胞的生理机能及代谢。本研究拟构建简单、稳定、实用的NMP系统,并探讨NMP减轻猪DCD供肝缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法1.NMP保存装置的建立:采用离心泵、氧合器、恒温水浴箱、连接管路、压力传感器、流量计等部件构建肝脏NMP保存装置,并通过对4只巴马小型猪肝脏的体外NMP保存,观察灌注保存期间门静脉和肝动脉的压力及流量、肝脏温度、灌注液的生化指标、肝组织的常规病理及超微病理变化、胆汁分泌量等指标;2.无转流猪原位肝移植模型的建立:选用健康巴马小型猪30只,采用无转流技术建立原位肝移植模型,观察术中血流动力学变化、动脉血气指标变化、术后存活率以及术后并发症发生情况,验证模型稳定性;3.NMP对猪DCD供肝的修复作用及其机制:选用健康巴马小型猪24只,随机分为两组,心脏停跳40min后,A组以NMP保存6h,B组以UW液单纯低温保存6h,然后两组均行原位无转流肝移植术,比较术后5d存活率、血清生化指标、肝组织病理变化以及肝组织细胞因子的表达情况。结果1.成功建立了肝脏NMP装置,对小型猪肝脏进行体外灌注保存过程中,温度控制、门静脉和肝动脉的压力及流量稳定,灌注保存液中的ALT、AST、LDH、ALP、乳酸等指标在保存的开始出现一定水平的升高,之后维持在较稳定的水平,胆汁分泌量平均为10.3±3.61mL/h（8-15mL/h）,肝脏常规及超微病理示肝脏保存6h后组织结构基本正常;2.经过早期的技术训练后,猪肝移植术后5天存活率达100%,无手术相关并发症,术中无肝期的CVP、MAP明显下降,心率明显加快,再灌注后动脉血pH、HCO3-、BE等指标明显降低;3.A组和B组的手术成功率分别为100%和16.7%,术后5天存活率分别为100%和0,两组间比较具有显著性差异（P<0.05）;经过40min热缺血和6h保存后,A组供肝组织中ATP、SOD及HSP-70含量高于B组,TNF-α、ROS、BCL-2、ET-1及ICAM-1含量低于B组,两组间比较有统计学差异（P<0.05）;再灌注后,A组肝组织中SOD及HSP-70含量高于B组,TNF-α、IL-1、ROS、BCL-2、ET-1及ICAM-1均低于B组,血清ALT、AST、LDH和乳酸等生化指标低于B组,两组间比较有统计学差异（P<0.05）;肝脏常规病理和超微病理检查提示,NMP保存供肝6h后,热缺血导致的肝细胞损伤明显减轻,肝组织细胞损伤程度A组明显轻于B组,再灌注后也表现出同样的结果。结论1、本研究成功建立了肝脏NMP保存装置,该装置使用简便、运行稳定,对小型猪肝脏进行体外保存过程中,无明显肝组织损伤;2、成功建立了猪无转流原位肝移植模型,经过技术训练后手术成功率达到100%,具有良好的稳定性及重复性,其手术成功的关键因素是缩短无肝期手术时间及以无肝期为重点的围手术期处理;3、经猪肝移植模型证实,NMP保存可明显减轻猪DCD供肝的缺血再灌注损伤,在体外对DCD供肝进行修复,改善肝移植的预后,其作用机制与NMP可模拟器官的生理环境,维持细胞代谢,逆转热缺血过程中ATP供应中断引起的损伤,恢复供肝能量储备,避免低温导致的肝窦内皮损伤,促进上调保护性蛋白,减少保存期间和再灌注后炎性细胞因子的表达等有关。