目的：　　 1．本实验室对姜黄素进行结构改造，合成了大量单羰基姜黄素类似物。本文运用MTT的方法对合成的158种类似物（附录1）进行初筛以期得到一批具有较好活性的化合物。　　 2．研究初筛得到的活性化合物对5种不同肿瘤细胞增殖的影响，研究其抗肿瘤谱，并做量效关系研究。　　 3．研究活性化合物对GADD153/CHOP蛋白表达的影响。　　 4．研究活性化合物在mRNA水平上对GADD153/CHOP，XBP-1，GRP-78，ATF-4的影响。　　 5．研究活性化合物对细胞凋亡的影响，探讨其抗肿瘤活性发挥作用的分子机制。　　 方法：　　 1．姜黄素在临床应用中存在代谢过快、半衰期短、血药浓度低、生物利用度低等药代缺陷，研究表明，其结构中含有的β-二酮基团是导致其代谢缺陷的主要原因，因此，我们去掉β-二酮基团，设计不含有β-二酮基团的单羰基类似物。　　 2．抗肿瘤活性筛选体外培养HepG2，H460，MCF-7，A549，A549/CDDP细胞，采用MTT法检测受测化合物对上述五种细胞的增殖抑制作用。　　 3．量效关系研究根据上述MTT的结果，选取活性较好的7个化合物，用MTT法研究其抗肿瘤细胞增殖作用的量效关系。　　 4．检测GADD153/CHOP蛋白表达情况Westernblot法检测上述5种细胞在活性较好的7个化合物作用下GADD153/CHOP蛋白表达情况。　　 5．检测凋亡情况根据Westernblot实验结果，选取化合物31，用AnnexinV/PI染色，流式细胞术检测细胞凋亡的情况。　　 6．检测ERS信号通路中的转录因子用Q-PCR的方法，检测细胞株H460在化合物31作用后GADD153/CHOP，XBP-1，GRP-78，ATF-4的mRNA的变化。　　 结果：　　 1．MTT结果显示部分受测姜黄素类似物可抑制上述5种肿瘤细胞，并具剂量依赖性，在浓度为20μM时，对细胞生长的抑制作用明显增强。　　 2．Westernblot分析显示，上述5种细胞在7个姜黄素类似物作用下，有的表达GADD153/CHOP，有的不表达GADD153/CHOP。GADD153/CHOP蛋白是内质网应激信号通路中的关键蛋白，对于有表达GADD153/CHOP的化合物，其抗肿瘤作用可能与内质网应激有关，其他化合物则可能通过其他途径发挥抗肿瘤作用。　　 3．流式细胞检测显示，与阴性对照DMSO相比，化合物31可明显诱导H460细胞凋亡。证实化合物31抗肿瘤活性发挥作用是通过凋亡途径进行的。　　 4．QPCR结果显示，在化合物31作用下，GADD153/CHOP，XBP-1，GRP-78，ATF-4的mRNA的表达增强，并呈现浓度依赖性，表明其诱导细胞凋亡的途径与内质网应激有关。　　 结论：　　 1．通过MTT实验，发现所合成的单羰基姜黄素类似物中，有一些活性较好,可以抑制肿瘤细胞的增殖，并且活性较好的7个化合物具有剂量依赖性。　　 2．通过检测内质网应激（endoplasmicreticulumstress，ERS）相关凋亡通路上的重要分子CHOP/GADD153相应蛋白表达的变化，推断其抗肿瘤活性的分子机制。　　 3．通过QPCR的方法检测与内质网应激（ERS）及凋亡相关分子CHOP/GADD153，XBP-1，GRP78，ATF-4mRNA的变化，进一步推断其抗肿瘤活性的分子机制。　　 4．通过AnnexinV/PI染色，流式细胞术检测细胞凋亡，从而确定其抗肿瘤活性的作用机制。