【摘 要】
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上皮钙粘蛋白(E-cadherin)和整合素αv(Integrinαv)同属跨膜糖蛋白,参与细胞间及细胞与细胞外基质相互粘附从而发挥相互作用,E-cadherin参与精卵间及精卵与输卵管上皮之间的相互作用且Integrinαv可特异性地识别精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arginine-Glycine-Aspartic,RGD)序列,参与细胞间的粘附,使精子与卵子于输卵管中粘附融合。其在雌性生殖中有着
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.31972760); 甘肃省教育厅产业支撑引导项目(No.31972760);
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上皮钙粘蛋白(E-cadherin)和整合素αv(Integrinαv)同属跨膜糖蛋白,参与细胞间及细胞与细胞外基质相互粘附从而发挥相互作用,E-cadherin参与精卵间及精卵与输卵管上皮之间的相互作用且Integrinαv可特异性地识别精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arginine-Glycine-Aspartic,RGD)序列,参与细胞间的粘附,使精子与卵子于输卵管中粘附融合。其在雌性生殖中有着至关重要的作用。雌性牦牛的生殖力低下一直是制约牧区经济发展的关键因素,因此,为探究E-cadherin和Integrinαv在雌性牦牛输卵管中的表达分布及其影响因素,本文做了以下研究:1.E-cadherin在牦牛不同繁殖阶段输卵管不同部位中的表达分布。本研究以卵泡期、黄体期、妊娠期牦牛输卵管伞部、壶腹部和峡部组织样品为材料。采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-Time Polymerase chain reaction,q RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western-blotting,WB)、免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)等方法对E-cadherin进行表达定位分析。(1)q RT-PCR和Western-blotting结果显示:在卵泡期和妊娠期,E-cadherin基因及蛋白在输卵管壶腹部的表达量最高,显著高于伞部(p<0.05);在黄体期,E-cadherin基因及蛋白在输卵管峡部的表达量最高,显著高于伞部和壶腹部(p<0.05)。(2)E-cadherin主要分布在输卵管伞部、壶腹部和峡部的纤毛细胞、分泌细胞、基细胞、肌层和浆液腺等部位。2.Integrinαv在牦牛不同繁殖阶段输卵管不同部位中的表达分布。本研究以卵泡期、黄体期、妊娠期牦牛输卵管伞部、壶腹部和峡部组织样品为材料。采用q RT-PCR、Western-blotting、IHC等方法对Integrinαv进行表达定位分析。(1)q RT-PCR和Western-blotting结果显示:在卵泡期,Integrinαv基因及蛋白在输卵管伞部的表达量最高,显著高于壶腹部和峡部(p<0.05);在黄体期,Integrinαv基因及蛋白在输卵管峡部的表达量最高,显著高于伞部和壶腹部(p<0.05);在妊娠期,Integrinαv基因在输卵管伞部的表达量最高,显著高于壶腹部和峡部(p<0.05),Integrinαv蛋白在输卵管峡部和伞部的表达差异不显著,但二者显著高于壶腹部(p<0.05)。(2)Integrinαv主要分布在输卵管伞部、壶腹部和峡部的纤毛细胞、分泌细胞、基细胞、肌层和浆液腺等部位。3.转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)对牦牛输卵管上皮细胞(Oviductal epithelial cell,OEC)中E-cadherin和Integrinαv的表达影响,以牦牛输卵管上皮细胞为试验材料,分离培养牦牛输卵管上皮细胞,采用q RT-PCR、Western-blotting和细胞免疫荧光(Immunoflurescence,IF)方法探究TGF-β1对E-cadherin和Integrinαv在牦牛输卵管上皮细胞中的表达影响。(1)IF结果显示:E-cadherin主要在输卵管上皮细胞细胞质中表达,Integrinαv主要在输卵管上皮细胞细胞核和细胞质中表达。(2)TGF-β1对牦牛输卵管上皮细胞中E-cadherin和Integrinαv的表达均有调控作用,其中TGF-β1以剂量依赖型的方式调节E-cadherin的表达,随着TGF-β1浓度的增加,E-cadherin的表达呈上升趋势,Integrinαv的表达随着TGF-β1浓度的增加呈现先下降后上升的趋势。综上所述,本研究通过对E-cadherin和Integrinαv在牦牛不同繁殖阶段输卵管不同部位中的表达分布及TGF-β1对其表达的影响,表明两者均可参与输卵管卵子和受精卵的运输及发育,且OEC细胞中E-cadherin和Integrinαv表达受TGF-β1调控,并具有浓度依赖性。结果为探索E-cadherin和Integrinαv介导TGF-β1调控牦牛早期胚胎发育提供了科学突破点。
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