酪丝缬肽对肿瘤转移的治疗作用及其机制探讨

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目的:观察三肽化合物酪丝缬肽(Tyroservatide,YSV)对肿瘤转移的治疗作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法:1.建立C57BL/6小鼠黑色素瘤B16-F10人工肺转移模型,观察YSV对B16-F10人工肺转移的抑制作用,计算小鼠肺转移瘤灶数。2.建立裸鼠人卵巢癌SKOV-3腹腔转移瘤模型,观察YSV对SKOV-3腹腔转移的抑制作用,计算SKOV-3腹腔转移裸鼠的生存时间,计算裸鼠腹腔内转移结节数。3.建立裸鼠人结肠癌HT-29和SW620脾移植后肝转移模型,观察YSV对HT-29和SW620细胞肝转移的抑制作用,计算肝指数(肝重/体重);同时观察YSV对HT-29和SW620肿瘤脾移植瘤生长的抑制作用,计算脾指数(脾重/体重)。4.建立小鼠黑色素瘤B16细胞和人结肠癌HT-29细胞小鼠皮下移植瘤模型,观察YSV对肿瘤细胞在动物体内增殖的抑制作用。5.应用MTT法观察YSV对体外培养的小鼠黑色素瘤B16-F10细胞、人卵巢癌SKOV-3细胞、人结肠癌HT-29和SW620细胞增殖的抑制作用。6.应用MTT法观察YSV对体外培养的B16-F10细胞、SKOV-3细胞、HT-29和SW620细胞与Matrigel胶粘附能力的影响。应用Transwell小室实验模型观察YSV对B16-F10细胞、SKOV-3细胞、HT-29和SW620细胞侵袭能力的影响。7.应用免疫组化方法观察YSV对B16-F10细胞和B16-F10人工肺转移模型中肿瘤组织上ICAM-1的蛋白表达的影响。应用免疫印迹的方法、实时荧光定量PCR技术,分别观察YSV对B16-F10细胞ICAM-1蛋白表达水平和mRNA水平的影响。8.应用酶谱分析的方法,观察YSV对SKOV-3、HT-29和SW620细胞的MMP-2、MMP-9蛋白活性的影响;应用免疫印迹技术观察SKOV-3、HT029和SW620细胞及其体内肿瘤转移组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平的影响;用实时荧光定量PCR观察YSV对SKOV-3、HT-29和SW620细胞及其体内肿瘤转移组织中MMP-2和MMP-9 mRNA水平的影响。结果:1.YSV(640μg/kg╱d)可以显著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10肺转移灶的形成,抑制率达62.21%。病理结果发现,YSV给药组与生理盐水组相比转移灶肿瘤组织面积较小,可见片状坏死。2.YSV(640μg/kg/d、320μg/kg╱d)可以显著延长人卵巢癌SKOV-3腹腔转移瘤裸鼠生存时间,生命延长率最高为32.27%;可以显著抑制SKOV-3腹腔转移结节数,最高抑制率为52.93%。3.YSV(640μg/kg/d、320μg╱kg╱d)可以显著抑制人结肠癌HT-29和SW620细胞的肝转移,同时抑制脾原发肿瘤的生长。4.YSV(640μg/kg/d、320μg/kg/d、160μg/kg/d)可以显著抑制黑色素瘤B16小鼠移植瘤的生长,最高抑制率为54.32%。YSV(640μg/kg/d、320μg/kg/d)可以显著抑制人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤的生长,最高抑制率为45.67%。5.YSV可以显著抑制体外培养的小鼠黑色素瘤B16-F10、人卵巢癌SKOV-3、人结肠癌HT-29和SW620细胞的增殖,其最高抑制率分别可达50.13%、42.7%、64.32%、63.28%。6.YSV可以显著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10、人卵巢癌SKOV-3、人结肠癌HT-29和SW620细胞在体外与Matrigel胶的粘附,其最高抑制率分别可达41.08%、30.87%、38.14%、47.06%;可以显著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10、人卵巢癌SKOV-3、人结肠癌HT-29和SW620细胞的体外侵袭能力,其最高抑制率分别可达41.52%、54.55%、62.82%、46.25%。7.YSV可以显著抑制B16-F10细胞及其人工肺转移模型中肿瘤组织上ICAM-1蛋白的表达,显著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞ICAM-1 mRNA水平。8.YSV可以显著抑制人卵巢癌SKOV-3、人结肠癌HT-29和SW620细胞的MMP-2、MMP-9的蛋白活性;可以显著抑制SKOV-3、HT-29和SW620细胞及其体内肿瘤转移组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达及mRNA水平。结论:YSV下调ICAM-1、MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白表达水平,抑制肿瘤细胞的粘附、侵袭、增殖,从而抑制黑色素瘤的肺转移、卵巢癌的腹腔转移及结肠癌的肝转移。
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