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卡介菌多糖核酸（Bacillus Calmette Guerin polysaccharide nucleic acid，BCG-PSN）是一种新型免疫调节剂，具有提高T淋巴细胞免疫功能;激活T淋巴细胞，促进白细胞介素等分泌，从而产生多种免疫调节的淋巴因子;增强巨噬细胞功能，提高机体杀伤细菌、病毒能力;提高溶菌酶活力等众多作用。经临床试验证实，BCG-PSN目前已成为防治哮喘、慢性支气管炎、风湿性关节炎、神经性皮炎等病症较为理想的药物。为进一步提高BCG-PSN的疗效并减少其不良反应，我们在本试验中采用独特的低温细菌细胞破壁、热酚提取法分离和提纯BCG-PSN，并设计了适合本药物的的薄膜蒸发法制备BCG-PSN脂质体。同时为了提高药物稳定性，制备了BCG-PSN冻干脂质体。在此基础上，我们对BCG-PSN免疫增强作用及其安全性进行评价，为BCG-PSN在畜牧养殖业中的应用提供试验和理论依据。
1.BCG-PSN制备条件的优化及其质量控制为了优化BCG-PSN制备工艺，试验采用超声破碎卡介菌(BCG)的细胞壁，利用热酚法除去菌体蛋白，以多糖核酸的含量为考察指标，选取苯酚浓度、热酚次数、乙醇用量三个因素，每个因素三个水平，通过正交试验L9(33)确定BCG-PSN的最佳提取工艺和条件。结果表明，对BCG-PSN提取量影响因素的大小依次是热酚次数、苯酚浓度、乙醇用量，并且90％苯酚、热酚处理次数为4次、浓缩液∶乙醇为1∶5时，所获得的BCG-PSN含量最大(96.488％)，而且对上述最佳工艺进行了重复性验证，证实其具有良好的重现性。
2.BCG-PSN与IBD疫苗联合应用对鸡的免疫增强作用将0.6 mg·kg-1，0.3mg·kg-1，0.15 mg·kg-1，0.075 mg·kg-1和0.0375 mg·kg-1的BCG-PSN与IBD疫苗联合应用于人工感染IBDV的受试雏鸡，通过测定免疫器官指数、IBD抗体滴度、外周血T淋巴细胞亚群、巨噬细胞吞噬活性、血清IFN-γ及IL-2浓度等免疫学指标，研究BCG-PSN和IBD疫苗的免疫协同作用及其效果。研究结果表明，与单用IBD疫苗比较，高剂量BCG-PSN(0.6 mg·kg-1)能够极显著地升高脾脏和胸腺系数，中剂量(0.15mg·kg-1)、低剂量(0.075 mg·kg-1) BCG-PSN能极显著延缓法氏囊退化;中剂量(0.15mg·kg-1)的BCG-PSN能够明显诱导IBD抗体的产生和提高CD4+/CD8+T淋巴细胞比值，维持CD4+和CD8+T淋巴细胞的平衡;BCG-PSN显著升高鸡血清IFN-γ和IL-2含量，而且作用持续时间相对较长，尤其对IL-2的持续诱导效果更为明显。说明与IBD疫苗联合应用，BCG-PSN能够剂量相关性的促进鸡机体产生相应抗体，同时增强机体体液免疫和细胞免疫作用;BCG-PSN对非特异性免疫没有明显影响。
3.BCG-PSN安全性观察BCG-PSN的静脉刺激性、溶血及过敏反应。以药物最大溶解度为最高剂量，小鼠分别腹腔注射不同剂量的BCG-PSN，测定其急性毒性;小鼠腹腔注射不同剂量的BCG-PSN，连续给药14 d，观察其亚慢性毒性;小鼠腹腔注射不同剂量的BCG-PSN，以小鼠骨髓微核扣精子畸形为指标，评价其致突变作用。结果表明，BCG-PSN无静脉刺激性、溶血及过敏反应。腹腔注射不同剂量的BCG-PSN，最高剂量2000 mg·kg-1·bw-1，连续观察14d，小鼠仅出现轻微的中毒症状，未出现死亡，故小鼠腹腔注射BCG-PSN的最大给药量为2000 mg·kg-1·bw-1;与正常对照组比较，亚慢性毒性试验小鼠在整个试验周期内反应灵敏、活动正常且未出现死亡;BCG-PSN高、中剂量组小鼠进食量在前期显著降低，高剂量组小鼠体重在试验前期显著下降;高剂量组脾脏指数显著升高，高、中剂量组白细胞总数、红细胞总数、血红蛋白、红细胞压积和平均红细胞容积显著降低，尿素氮显著升高，高剂量组白蛋白显著降低。其他各项指标及病理组织学检查结果与正常对照组没有显著性差异。小鼠致畸初步试验结果表明，BCG-PSN对骨髓微核和精子畸形试验结果均为阴性。试验证实，小鼠腹腔注射BCG-PSN的最大给药量为2000 mg·kg-1·bw-1，长期大剂量应用BCG-PSN可能引起贫血，无致突变作用。
4.BCG-PSN脂质体的制备根据水溶解性药物的特点，本论文选用经典的薄膜蒸发法制备BCG-PSN脂质体（附图），并采用星点设计-归一化法优化普通BCG-PSN脂质体(FBL)的处方。在单因素考察的基础上，确定三个自变量为BCG-PSN/卵磷脂（％，w/w）、胆固醇/卵磷脂(％，w/w)以及BCG-PSN加入量(mg);因变量为包封率(％)、回收率(％)、粒径与5000nm的差以及径距。研究结果表明，以优化处方制备样品，各指标实测值与预测值偏差较小。
5.BCG-PSN冻干脂质体的制备及其稳定性本试验通过正交试验得到最佳处方，确定BCG-PSN冻干脂质体(PBL)的最佳参数。在此基础上，对修饰前后BCG-PSN脂质体的性质及其在光照、分散介质、模拟生物环境以及长期放置稳定性进行了研究，并同时以BCG-PSN注射液作为对照。结果显示，BCG-PSN冻干脂质体体外稳定性较普通BCG-PSN脂质体更强。