【摘 要】
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该研究首先利用化学方法成功制备了一批大小均匀的表面富含氨基的硅纳米颗粒和荧光纳米颗粒,然后用原核表达腺病毒(Ad5)的衣壳蛋白knob(腺病毒侵染细胞的关键结构功能域[6])
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该研究首先利用化学方法成功制备了一批大小均匀的表面富含氨基的硅纳米颗粒和荧光纳米颗粒,然后用原核表达腺病毒(Ad5)的衣壳蛋白knob(腺病毒侵染细胞的关键结构功能域[6])进行修饰,与DNA结合形成病毒样纳米颗粒.研究显示:电镜检测纳米颗粒的粒径约为40nm;Zeta电位仪检测Zeta电位,在中性的条件下,氨基化硅纳米颗粒的表面净正电荷约为16mV;琼脂糖胶检测与DNA的结合能力,发现氨基化硅纳米颗粒能与质粒DNA有效结合,并且还发现质粒DNA在与氨基化硅纳米颗粒形成复合体后能有效的抵抗血清或DNaseI对DNA的降解;显微镜观察到荧光纳米颗粒加入常规培养的HT1080细胞中后可进入细胞内;该纳米颗粒的毒性实验表明,纳米颗粒对细胞生长无明显影响,对实验动物无生长和生殖毒性,与对照组相比无显著性差异;细胞转染实验表明,用绿色荧光蛋白(GFP)基因作报告基因,在用Ad5-knob蛋白修饰硅纳米颗粒后转染常规培养的Hela细胞(表面含有Ad5结合受体),发现GFP基因在Hela细胞内得到了高效的表达,转染效率高于HT1080细胞(表面不含有Ad5结合受体)组,说明经Ad5-Knob修饰的硅纳米颗粒有一定的细胞特异性和靶向性.总之,该研究所得到的Ad5-knob修饰的硅纳米颗粒,即病毒样纳米颗粒可作为一种新型的基因靶向转移载体.这些研究结果将为下一步体内长循环装载靶向性基因作了一个铺垫.
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