生防木霉菌T4和枯草芽孢杆菌B99-2制剂的研制及田间试验

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解决限制微生物农药制剂生产与应用货架期短的这一瓶颈问题,制备适合工业生产和农业应用的微生物农药新剂型,是目前微生物农药发展的关键。本文针对这一关键问题,研究了木霉菌T4厚垣孢子的产生条件,以及木霉菌T4厚垣孢子水分散粒剂和枯草芽孢杆菌B99-2微胶囊的研制工作,并将获得的制剂用于田间防效试验。为了探索木霉菌T4液体培养生产厚垣孢子的条件和工艺,通过响应面分析等方法,获得最佳的培养基配方为:碳源A23.85g/L,碳酸钙1.0g/L,碳源14.83g/L,硫酸铵2.0g/L,磷酸二氢钾1.0g/L。通过筛选、优化分散剂及其添加量、接种量和发酵天数,获得木霉菌T4的发酵工艺:吐温80添加量为0.5%,接种量为2×107个/mL分生孢子,温度28℃,发酵时间6天。可以得到最大的游离厚垣孢子数量为1.55×107个/mL,总厚垣孢子数量为3.35×107个/mL通过对UV保护剂、稳定剂、粘结剂、崩解剂的筛选及其生物相容性和水分散粒剂的性能研究,获得木霉菌T4水分散粒剂的配方为:白炭黑10%,UV保护剂A0.4%,热稳定剂B3%,EFW4%,崩解剂C4%,黏结剂D5%。制备工艺过程为:将载体与润湿分散剂、保护剂、稳定剂、崩解剂按照配方比例混匀,然后将混合物按照21.4%加入发酵液中,在37℃下干燥至含水量20%左右,5%黏结剂加水溶解,加入混合物中,使最终的固形物含水量在25%左右,然后造粒,干燥。得到的木霉菌T4水分散粒剂的菌含量为8.5×108个/g,悬浮率为43.8%,润湿时间为1.0s,崩解时间为52s。水分散粒剂有溶于水后快速崩解分散,在使用过程中避免了粉尘飞扬,兼有可湿性粉剂和水悬浮剂的优点。这为工业化生产研究提供了依据。为了提高枯草芽孢杆菌微胶囊的包埋效率,同时降低干燥成本和延长菌体的贮存时间。本文通过优化海藻酸钙微胶囊的制备过程,得到可以工业化生产枯草芽孢杆菌微胶囊的工艺:先用载体A吸附枯草芽孢杆菌,得到囊芯,然后用乳化法制备微胶囊。该优化方法不仅提高了菌体的包埋效率,同时可以在室温(22℃-25℃)下24h就达到干燥要求,从而避免使用冷冻干燥技术。枯草芽孢杆菌B99-2海藻酸钙微胶囊在热处理(54℃,14天),UV处理以及室温储存半年的存活率分别为60.82%,57.82%和97.56%,远远高于未包裹菌体的38.27%,40.27%和36.22%。同时制备的微胶囊在裂解液中具有快速释放菌体的优点。将木霉菌T4水分散粒剂和枯草芽孢杆菌B99-2微胶囊用于大棚的病害防治,它们对葡萄灰霉病均有较好的防治效果,防效分别达到40.72%和39.87%,与化学杀菌剂40%嘧霉胺悬浮剂和50%腐霉利可湿性粉剂的防治效果相当。
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