犬细小病毒单克隆抗体的制备和初步应用

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由犬细小病毒(Canine Parvovirus, CPV )引起的急性出血性胃肠炎和心肌炎是近年来发现的一种犬烈性传染病,主要危害幼犬,特别是2~6月龄幼犬,发病率和死亡率均很高。该病自首次报道以来,在世界各国均有发生和流行。本研究利用CPV胶体金试纸条对收集的10份临床样品进行检测,共检测到4份阳性。用上述阳性样品接种FK-81细胞培养后,成功地分离到一株CPV(2#),以此为抗原制备了针对该病毒的单克隆抗体(Monoclonal antibody, McAb)。McAb的制备方法如下:用PEG沉淀法浓缩CPV的细胞培养液,依此为抗原免疫8周龄BALB/c小鼠,经过3次皮下注射免疫后,再进行尾静脉加强免疫,3d后取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0-Ag-14进行融合。通过间接ELISA试验对杂交瘤细胞进行筛选,阳性株按有限稀释法进行3次亚克隆后,共获得了2株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为4E4和5C8,细胞上清效价为1:103和1:104,腹水效价为1:107和1:108,中和效价都为1:320,亚类鉴定结果表明4E4属于IgM、5C8属于IgG1。应用这两株McAb的中和特性,在扬州等地对CPV感染犬进行临床治疗,治愈率达90.7%,效果显著。
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