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目的:观察高糖对小鼠心脏成纤维细胞HMGB1表达的影响,及抑制HMGB1后对高糖引起的小鼠心脏成纤维细胞TGF-β1、collagenⅠ表达的影响。
方法:(1)酶消化法分离小鼠心脏成纤维细胞,差速贴壁法去除心肌细胞。波形蛋白免疫细胞化学染色鉴定成纤维细胞。(2)高糖(25mmol/l)诱导细胞。(3)将HMGBlsiRNAs和阴性对照通过脂质体转染试剂RNAiMAX转染到心脏成纤维细胞中。(4)qRT-PCR检测细胞HMGB1、TGF-β1、collagenⅠmRNA表达,Westernblot检测HMGB1蛋白表达,ELISA检测细胞上清中的TGF-β1、collagenⅠ蛋白浓度。
结果:(1)使用酶消化法和差速贴壁法获得的高纯度细胞符合成纤维细胞的形态特征并且波形蛋白免疫细胞化学染色阳性(2)高糖诱导6小时后成纤维细胞的HMGB1表达即上升。高糖导致TGF-β1和collagenⅠ的表达上调。抑制HMGB1的表达(基因沉默)能够抑制高糖诱导的TGF-β1和collagenⅠ的表达增高。
结论:我们的研究表明HMGB1在高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞TGF-β1和collagenⅠ的表达上升中发挥重要作用。HMGB1可能参与调节糖尿病诱导的心肌纤维化。