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β淀粉样蛋白（Amyloidβ，Aβ）是比较公认的阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease，AD）的原发性致病因子，Aβ在脑内的异常聚合和沉积是AD发病机制的中心环节。靶向Aβ的被动免疫治疗已在AD模型动物上取得显著效果，但抗体的鼠源性限制了其在人体的应用。研制合适的人源化抗体是开展人体Aβ免疫疗法的首要条件。利用噬菌体抗体库技术获得的单链抗体为全人源性，更适用于人体。本课题组之前已经以Aβ1-40为靶标，筛选噬菌体单链抗体库获得了抗Aβ1-40单链抗体E3（single chain variable fragment E3，E3 scfv）的基因片段，并对单链抗体E3初步进行了体外实验。本研究在固定诱导表达时间和诱导表达温度的条件下，采用不同终浓度的IPTG进行诱导表达，通过SDS-PAGE分析全菌目的蛋白质E3 scfv的表达水平，确定了E3 scfv在20℃诱导表达18 h时，所需诱导剂IPTG的最佳浓度为0.1 mM；纯化时，对样品依次用含咪唑10 mM、20 mM、30 mM、40 mM、50 mM、60 mM、70 mM、80 mM、90 mM、100 mM、1 M的结合液各5 ml进行洗脱，收集各管洗脱液，进行Western blotting鉴定，确定了预洗液含咪唑的最佳浓度为10 mM，为E3 scfv建立了稳定的表达、纯化流程。以纯化的E3 scfv为固定相，筛选噬菌体随机十二肽库，通过四轮淘筛，随机挑选了94个噬菌体进行ELISA分析，选取其中24个强阳性噬菌体克隆进行DNA测序，得到唯一序列，其相应的氨基酸序列为FTPYPLTAPVGS。将该序列与Aβ1-40的氨基酸序列比对后发现，其VGS氨基酸序列存在于Aβ1-40的24-26位。我们又选取了ELISA读值最低的4个克隆噬菌体进行DNA序列分析，结果表明，它们含两个不同序列即：DTTGHMRGPSTL和ICTPWRSGCMAS，与阳性序列均无同源性。初步判断，E3 scfv的抗原表位位于Aβ1-40的24-26位。本研究为该抗体的后续AD模型动物实验和临床验证及其产业化推广奠定了基础。