水禽是禽流感病毒的天然储存库,为了研究高致病性禽流感病毒对水禽致病性的分子基础和建立合适的动物模型,本论文做了如下试验。用Trizol从含DKHB/49/05株病毒的鸡胚尿囊液中提取总RNA,用RT-PCR扩增出PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS八个基因片段,将其处理以后,分别克隆至pBD载体中,将重组好的阳性PBD质粒转染293T细胞,救获了与亲本病毒的基因序列完全一致的病毒,并命名为R-DKHB,并成功构建了DKHB/49/05的8质粒反向遗传操作系统。以家鸭为水禽动物模型,用不同浓度的R-DKHB和DKHB/49/05经鼻腔感染鸭子,14天内观察鸭子的发病情况和死亡情况,并检测了病毒在鸭子不同组织器官和分泌物中的含量;同时攻毒后第三天各组扑杀部分鸭子,采集脏器制作病理图片,详细观察了不同毒株的致病作用。结果显示:除了102EID50的R-DKHB和102EID50DKHB/49/05组没有鸭子死亡以外,其余各组都有鸭子死亡;106EID50剂量组的喉头和泄殖腔拭子的病毒含量最高,R-DKHB组和DKHB/49/05组的分别为3.9±0.6logEID50 ,2.9±1.2 logEID50和3.3±0.8logEID50 , 2.5±0.5logEID50;经测定106EID50R-DKHB和106EID50DKHB/49/05组鸭子脏器中病毒含量都很高,大脑的含量最高分别达到6.63±0.17logEID50、6.59±0.28logEID50;106EID50R-DKHB、106EID50DKHB/49/05组和对照组鸭子脏器的病理切片结果显示,攻毒组家鸭大脑出现水肿并且有神经细胞坏死灶,肺脏无明显变化,肾脏小血管内有血栓形成,胰腺细胞坏死崩解呈灶状。