用于海水有机磷农药监测的固定化乙酰胆碱酯酶制备与性质研究

来源 :中国海洋大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:x737101013
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
有机磷农药(OPs)因其低残毒、易水解的特性逐渐取代了有机氯杀虫剂广泛用于农业生产,但农药的大量使用,导致其进入河流、湖泊、海洋等各种水体,对环境产生危害。近岸海域的有机磷农药污染不仅威胁到海水养殖业的可持续发展,最终也会通过食物链进入人体严重影响人类健康。近些年来,用于农药分析的现场快速检测方法迅速发展起来,其中以酶抑制法为基础的乙酰胆碱酯酶(AChE)传感器应用较为广泛。AChE的固定化是酶传感器制作的关键,它决定着酶传感器的稳定性、灵敏度、选择性和实际应用价值。但常用的载体材料性能不理想,因而不利于酶传感器的使用和推广。   壳聚糖(Chitosan, CS)是由甲壳素脱乙酰基得到的线型高分子聚合物,分子结构中存在大量活性氨基和羟基,具有来源广泛、成本低廉、化学性质稳定、生物相容性好等优点,常被作为酶固定化的载体。将其制成壳聚糖微球(Chitosanmicrospheres,CS-MS),不仅可保留CS原有的性质,而且机械性能将明显提高,更适于流动注射系统中固定化酶的制备。   本研究以电鳗AChE为生物材料,采用乳液交联法制得CS-MS作为酶的载体,然后以戊二醛(GA)为交联剂,采用共价交联法进行AChE的固定,研究各种固定条件对酶活回收率的影响,确定适宜的固定条件:将1gCS-MS用5ml.0.5%(v/v)的GA活化0.25h后,然后将其投入含0.75U的AChE、pH7.07.5的PBS中反应24h,此条件下制备的固定化AChE酶活回收率达81.94%,优于国内外同类研究结果。通过设计正交试验,以酶活回收率为评价指标,并综合考虑微球的物理性能,优化了CS-MS的制备条件,研究发现水油相体积比1:4、搅拌速度700r/min、分散时间1h、GA用量0.5ml、交联时间0.5h时,制备的微球机械性能和固定酶效果较好。   另外,红外光谱结果表明,AChE与载体结合过程中,微球上悬挂-CHO与酶-NH2之间通过共价反应生成Schiff碱,同时微球上C6-OH与酶-NH2还能够形成氢键。扫描电镜观察显示,CS-MS基本呈球形,具有错综复杂的空间网状结构,经GA活化的微球表面相对平整光滑,有利于酶的固定。   固定化AChE在海水体系中表现出良好的适应能力,固定化酶的适宜温度较溶液酶向高温方向移动,适宜pH范围未发生移动,抗盐能力略有提高。且固定化酶热稳定性和储存稳定性明显优于溶液酶,固定化酶在4℃磷酸盐缓冲溶液中保存60d后活力仅损失17%。同时固定化过程使酶分子的空间构象发生一定改变,产生了空间立体障碍或扩散阻力,米氏常数由8.157mmol/L提高到46.18mmol/L,降低了酶与底物的亲和力。   将本研究中制备的固定化AChE作为生物识别元件,对海水中OPs的监测研究进行初步探索。结果表明,农药浓度100μg/L,抑制温度30℃时,甲基对硫磷、马拉硫磷、毒死蜱三种OPs对固定化AChE的最佳抑制时间为分别为30、20、20min,同时确定固定化酶对农药的响应规律,其对三种OPs的检测下限分别为5.34、5.75、5.95μg/L。因此,以固定化AChE最为敏感的甲基对硫磷作为参比农药,确定单位毒性当量为5.63μg/L,并采用毒性当量法评价海水样品中农药的综合污染水平。   综上所述,以壳聚糖微球为载体制备固定AChE,酶活回收率较高,机械性能良好,且其来源丰富,因而是一种很有潜力的AChE固定载体。固定化酶在海水体系中具有良好的酶学性能,对于有机磷农药具有响应快、灵敏度高等特点,并且毒性当量评价方法方便快速,由参比农药求出的毒性当量值更能反映农药的综合毒性及其污染的综合程度,在快速监测有机磷农药技术中展现出一定的应用前景。
其他文献
随着新课程改革的推进,信息技术的快速发展,在高等教学中如何融入微课教学,进而提升课堂教学质量,是必须要面临的问题.本文以高等数学教学为例,对微课的应用展开详细分析,用
目前,海南正处于全岛建设自由贸易试验区的起步阶段,各方力量都应该支持海南逐步探索、稳步推进中国特色自由贸易港建设.海口经济学院作为培养财会人才的本科院校,其财会专业
热障涂层(Thermal barrier coatings,简称TBCs)是一种应用在发动机高温金属部件表面的耐高温、隔热陶瓷材料,能增加燃气进口温度从而有效地提高发动机的性能和热效率。但复杂
开设第二课堂是高校一直以来进行辅助学习的形式,用以提升学生专业实践能力.第二课堂开展方式多样,通过分析第二课堂建设的目的,以海口经济学院财务会计学院所成立的“会计社
高校人才培养的主要环节就是实验教学,也是培养学生创新创业能力与综合实践能力的关键.实验教学中引入在线开放课程,有助于转变传统实验模式的不足,提升实验教学质量.通过分
在高等教育内涵式发展的新形势下,对高校管理工作的发展提出了新的要求.高校管理工作必须对标新要求,牢固树立一流意识,紧紧聚焦一流的管理,努力打造一流的服务,积极营造一流
我国应用型民办高校尤其注重对学生“双创”能力的培养和“双创”师资队伍的建设.而应用型民办高校因建校时间短,“双创”教育起步晚,师资队伍力量薄弱,“双创”教育存在一定
经过几十年的发展,EBSD技术已经成为分析晶体材料微观结构的重要手段之一。然而,现有的EBSD软件都是用运动学电子衍射理论模拟的EBSD花样。用运动学理论模拟的EBSD花样只是在几
碱性分子筛作为一类重要的固体碱催化材料,具有较高的比表面积和独特的择形性。同时其具有优异的反应活性、无腐蚀性以及对环境友好等优点。碱性分子筛可以通过碱金属离子交换