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目的:基于中医“阴阳互济”理论,研究滋补肾阴的左归丸与温补肾阳的右归丸对PMOP大鼠骨/骨髓成脂分化的不同作用,并通过AMPK/m TOR通路初步探究左、右归丸对PMOP大鼠成脂分化的作用差异,试阐明左、右归丸对PMOP大鼠成脂分化的调控机制。材料与方法:60只SPF级SD雌性未生育大鼠,随机分:空白组(Control)8只、假手术组(SHAM)8只以及去卵巢组44只,去卵巢组采用双侧卵巢切除法建立绝经后骨质疏松模型(Postmenopausal Osteoporosis,PMOP),SHAM组仅摘除卵巢周围等量脂肪,将手术后存活大鼠随机分为:模型组(OVX)、左归丸组(OVX+ZGW)、右归丸组(OVX+YGW)、补佳乐组(OVX+BJL)。造模7天后,灌胃给药。除造模、灌胃等因导致大鼠死亡与不符合纳入标准大鼠12只,共纳入大鼠48只。12周后,应用数字化全身骨密度仪检测大鼠右侧股骨骨密度;取材前禁食不禁水,末次给药2h后称重、麻醉,腹主动脉取血,血清离心分装于-80℃冰箱储存,用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中雌二醇含量;取大鼠子宫,称重,计算大鼠子宫指数,然后置于4%多聚甲醛中,以备子宫形态学检测;取大鼠左侧股骨,剔除筋膜肌肉,置于4%多聚甲醛中,脱钙21天,以备股骨形态学检测,采用HE法检测大鼠子宫、左侧股骨形态;取大鼠股骨,剪断股骨两端,用PBS缓冲液反复冲洗骨髓腔直至发白透亮,将冲出骨髓离心,弃去上层PBS,冻存于-80℃冰箱储存,以备基因与蛋白检测;取大鼠股骨干骺端,用湿纱布包裹冻存于-80℃冰箱储存,以备基因与蛋白检测,采用实时荧光定量PCR法检测大鼠骨、骨髓组织PPARγ、LPL、AMPK、m TORC1 m RNA的表达;采用蛋白免疫印迹法检测大鼠骨、骨髓组织PPARγ、LPL、C/EBPα、C/EBPβ、FABP4、TSC2、Rheb、4EBP1蛋白的表达以及AMPKα、m TOR、p70s6k1蛋白磷酸化水平。结果:1左、右归丸对PMOP模型大鼠的影响1.1左、右归丸对PMOP大鼠骨密度及形态的影响骨密度检测结果:与空白组比较,模型组大鼠BMD明显降低(P<0.01),成功制备PMOP模型大鼠;与模型组比较,左归丸组、右归丸组、补佳乐组大鼠BMD明显升高(P<0.01);与左归丸组比较,右归丸组、补佳乐组大鼠BMD无显著性差异(P>0.05)。骨形态检测结果:空白组与假手术组可见骨小梁呈网状,排列紧密规则,形态结构完整,骨髓腔间隙较小;模型组可见骨小梁总量减少,排列稀疏散乱,形态结构变细断裂,骨髓腔间隙增大。各给药组治疗12周后,骨形态均有不同程度的改善,骨小梁总量增多,部分排列逐渐规则呈网状,形态结构增宽,连接性在不同程度上得到改善,骨髓腔间隙减小。1.2左、右归丸对PMOP大鼠血清中E2水平的影响与空白组比较,模型组大鼠血清中E2水平明显降低(P<0.01),提示大鼠绝经后雌激素明显减少;与模型组比较,左归丸组、右归丸组、补佳乐组大鼠血清中E2水平明显升高(P<0.01或P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组、补佳乐组大鼠血清中E2水平无显著性差异(P>0.05)。1.3左、右归丸对PMOP大鼠子宫指数及形态的影响子宫指数检测结果:与空白组比较,模型组大鼠子宫指数明显降低(P<0.01);与模型组比较,左归丸组、右归丸组、补佳乐组大鼠子宫指数明显升高(P<0.05或P<0.01);与左归丸组比较,右归丸组、补佳乐组大鼠子宫指数无显著性差异(P>0.05)。子宫形态学检测结果:空白组大鼠子宫结构正常,子宫内膜包含单层柱状上皮,固有层分布较多的血管和子宫腺体,肌层为多层排列紧密的肌纤维,假手术组大鼠子宫没有显著的病理性改变;与空白组比较,模型组大鼠子宫明显萎缩,内膜明显变薄,内膜与肌层明显缩小,固有层腺体减少。与模型组比较,给药组均能对抗上述病理性改变,一定程度的缓解子宫萎缩状态。2左、右归丸对PMOP大鼠骨/骨髓PPARγ、LPL m RNA与蛋白及C/EBPα、C/EBPβ、FABP4蛋白表达的影响m RNA检测结果如下:与空白组比较,模型组大鼠骨/骨髓PPARγ、LPL m RNA显著升高(P<0.01);与模型组比较,左归丸组、右归丸组、补佳乐组大鼠骨/骨髓PPARγ、LPL m RNA显著降低(P<0.01);与左归丸组比较,右归丸组、补佳乐组大鼠骨/骨髓PPARγ、LPL m RNA显著升高(P<0.01)。蛋白检测结果如下:与空白组比较,模型组大鼠骨/骨髓PPARγ、LPL、C/EBPα、C/EBPβ、FABP4蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,左归丸组、右归丸组、补佳乐组大鼠骨/骨髓PPARγ、LPL、C/EBPα、C/EBPβ、FABP4蛋白表达降低(P<0.01或P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组大鼠骨/骨髓PPARγ、LPL、FABP4蛋白及骨髓组织C/EBPα蛋白、骨组织C/EBPβ蛋白表达显著升高(P<0.01),骨组织C/EBPα蛋白、骨髓组织C/EBPβ蛋白表达无显著性差异(P>0.05);与左归丸组比较,补佳乐组大鼠骨/骨髓PPARγ、LPL、C/EBPα、C/EBPβ、FABP4蛋白表达无显著性差异(P>0.05)。3左、右归丸对PMOP大鼠骨/骨髓AMPK/m TOR信号通路的影响m RNA检测结果如下:与空白组比较,模型组大鼠骨/骨髓AMPK m RNA显著升高(P<0.01),m TORC1 m RNA显著降低(P<0.01);与模型组比较,左归丸组、右归丸组、补佳乐组大鼠骨/骨髓AMPK m RNA显著降低(P<0.01),m TORC1 m RNA显著升高(P<0.01);与左归丸组比较,右归丸组、补佳乐组大鼠骨/骨髓AMPK m RNA升高(P<0.01或P<0.05),m TORC1 m RNA显著降低(P<0.01)。蛋白检测结果如下:与空白组比较,模型组大鼠骨/骨髓AMPKα蛋白磷酸化水平与TSC2蛋白表达显著升高(P<0.01),m TOR、p70s6k1蛋白磷酸化水平与Rheb蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,左归丸组、右归丸组、补佳乐组大鼠骨/骨髓AMPKα蛋白磷酸化水平与TSC2蛋白表达降低(P<0.01或P<0.05),m TOR、p70s6k1蛋白磷酸化水平与Rheb蛋白表达升高(P<0.01或P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组大鼠骨/骨髓AMPKα蛋白磷酸化水平无显著性差异(P>0.05),TSC2蛋白表达显著升高(P<0.01),大鼠骨组织m TOR及骨/骨髓p70s6k1蛋白磷酸化水平与骨组织Rheb蛋白表达降低(P<0.01或P<0.05),骨髓组织m TOR蛋白磷酸化水平与Rheb蛋白表达无显著性差异(P>0.05);与左归丸组比较,补佳乐组大鼠骨/骨髓AMPKα、m TOR蛋白磷酸化水平与TSC2、Rheb蛋白表达无显著性差异(P>0.05),骨/骨髓p70s6k1蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.01)。各组大鼠骨/骨髓4EBP1蛋白表达无统计学意义。结论:1 PMOP模型大鼠骨密度降低,骨组织微结构呈破损状态,雌激素水平降低,子宫组织明显萎缩。左、右归丸均能提高大鼠骨密度与雌激素水平,改善骨组织微结构,缓解大鼠子宫萎缩状态,有效防治PMOP。2 PMOP模型大鼠骨/骨髓呈现脂代谢紊乱,成脂分化过度的现象。左、右归丸均能降低PMOP模型大鼠骨/骨髓PPARγ、LPL m RNA与蛋白及C/EBPα、C/EBPβ、FABP4蛋白的表达,有效改善PMOP模型大鼠骨/骨髓脂代谢紊乱,降低PMOP模型大鼠成脂分化水平。3 PMOP模型大鼠骨/骨髓AMPK m RNA表达及其蛋白磷酸化水平与TSC2蛋白表达明显升高,m TOR m RNA表达及m TOR、p70s6k1蛋白磷酸化水平与Rheb蛋白表达降低。左、右归丸均在不同程度上对抗上述AMPK/m TOR相关指标的改变,从而调节AMPK/m TOR信号通路。4左、右归丸可能通过调节AMPK/m TOR信号通路降低PMOP模型大鼠成脂分化防治PMOP。