蛞蝓多糖PBP60组分分离纯化、结构鉴定及生物活性研究

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本文对双线嗜粘液蛞蝓多糖PBP60各组分进行了初步的研究:主要包括蛞蝓多糖PBP60组分分离纯化和理化性质研究、多糖的结构鉴定及生物活性研究。蛞蝓粗多糖经剪切酶提、乙醇分级醇沉后,通过DEAE Sepharose Fast Flow弱阴离子交换柱层析,脱盐后分别得到PBP60-A、PBP60-B、PBP60-C和PBP60-D四个组分。PBP60-A糖含量高,蛋白含量低,基本不含糖醛酸与氨基己糖,PBP60-B、PBP60-C和PBP60-D均含有一定量的蛋白、糖醛酸与氨基己糖,并含有多种氨基酸。PBP60-A经进一步分离纯化后得到单一多糖组分:PBP60-A2。PBP60-A2为白色粉末,平均分子量为39 kDa。紫外全扫描发现PBP60-A2不含核酸和蛋白质,HPLC分析表明该组分为单一组分。PBP60-A、PBP60-B、PBP60-C 和 PBP60-D 经红外、乙酰化和 PMP衍生化分析,可知PBP60-A由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖组成,其摩尔比为1.17:0.59:1.71:1.00:0.47:0.22,PBP60-B主要由甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、氨基半乳糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖组成,其摩尔比为0.90:0.31:1.15:0.37:0.24:1.02:3.84:0.93:1.99。PBP60-C 和 PBP60-D 主要由甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、氨基半乳糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖和一未知单糖组成,结合样品乙酰化分析结果,该未知单糖可能为3(4)-0-甲基己糖。PBP60-A2经单糖组成分析、甲基化分析及核磁共振分析,可知PBP60-A2主要由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为0.16:1.00:0.12,单糖残基主要有1-linked Glcp、1,6-linked Galp、1,2-linked Manp、1,6-linked Glcp、1,4-linked Glcp和 1,4,6-linked Glcp 等组成,主链由 1,4,6-trisubstituted-α-D-Glcp、1,4-disubstituted-α-D-Glcp和 1,4-disubstituted-β-D-Glcp三类单糖残基组成,支链主要有1,6-disubstituted-α-D-Glcp,同时还有少量的1-substituted-α-D-Glcp 和 1,2-disubstituted-α-D-Mancp。PBP60-A、PBP60-B、PBP60-C和PBP60-D四个组分的生物活性研究主要包括抗氧化活性与抗肿瘤活性。四个组分对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基的清除均具有一定作用,对ABTS自由基和超氧阴离子自由基清除能力尤为显著,其中以PBP60-D抗氧化能力最强。以MTT法测定了四个组分对A549细胞、MCF-7细胞和S180细胞的体外抑制作用及对CHL细胞的毒害作用,结果表明,四个组分中PBP60-C具有较好的抗肿瘤能力,对A549细胞、MCF-7细胞和S180细胞均有一定抑制作用,仅在最高试验浓度下才会抑制CHL细胞的增殖,但仍小于其对肿瘤细胞的抑制率。
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