水烛香蒲花粉(蒲黄)防治心肌缺血活性物质基础及其新资源的开发研究

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水烛香蒲(Typha angustifolia L.),为香蒲科(Typhaceae)香蒲属植物,中药蒲黄的最常见的原植物之一。本课题采用对麻醉犬心肌氧摄取率的影响模型,综合运用色谱分离技术,对水烛香蒲花粉(蒲黄)抗心肌缺血活性物质进行跟踪筛选、分离纯化,应用理化常数测定和光谱(UV,IR,MS,1H-NMR,13C-NMR,2D-NMR)分析技术鉴定结构,分别为:正二十六烷酸(1),异鼠李素-3-0-α-L-鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷,即异鼠李素-3-0-新橙皮糖苷(2),(2G-α-L-异鼠李素-3-0-鼠李糖基)-α-L-鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷,即香蒲新苷(3),其中化合物1为首次从该植物中分得。 以异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷为对照品,建立总黄酮紫外分光光度测定法,为蒲黄及其提取物的质量控制提供依据。采用正交设计确定了蒲黄总黄酮的提取工艺,结果显示,药材以70%乙醇1:1(溶剂体积:药材重量)常温浸润24小时,以70%乙醇8:1(溶剂体积:药材重量),煎煮2h,共3次,本工艺总黄酮的提取率为92.3%,提取较为完全。 应用1300型大孔吸附树脂对蒲黄总黄酮进行纯化,蒲黄总黄酮纯化工艺为:蒲黄药材70%乙醇煎煮液在应用旋转薄膜浓缩仪减压浓缩到浓度为2.5:1(药材重量:溶液体积);浓缩液过滤,滤液加蒸馏水稀释到1:1(药材重量:溶液体积),即为上柱样品液。将样品液按0.5倍树脂床体积(BV)上样量通入装有树脂的色谱柱中,依次用10BV蒸馏水、10BV的70%乙醇、10BV的95%乙醇梯度洗脱,流速为2.5 BV/h。70%乙醇洗脱液浓缩成浸膏,加10倍量95%乙醇,混合均匀,静置24h,过滤,滤液备用;沉淀用蒸馏水溶解,再加入10倍量95%乙醇,混合均匀,静置24h,过滤;合并滤液,回收乙醇至无醇味,浓缩液喷雾干燥,得淡黄色粉末,总黄酮的含量为60%以上。本工艺从药材到总黄酮成品,平均总得率为1.39%,平均纯度为65.4%。本工艺适用于从蒲黄药材中制备蒲黄总黄酮,具有稳定、快速、高得率及高转移率的优点;另外,除乙醇外,无须使用其它有机溶剂。 本实验采用麻醉犬冠状动脉左前降支结扎造成心肌梗塞模型,观察自制的蒲黄总黄酮提取物对心肌缺血的治疗作用。结果表明:蒲黄总黄酮提取物灌胃给药能显著降低冠脉结扎犬的心肌缺血的程度,缩小心肌缺血范围,定量组织学检测与心外膜
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