目的:探讨氧化应激对血小板自噬及血小板活性的影响,并观察自噬对血小板中miR-27a、抗增殖蛋白（Prohibitin,PHB）表达的影响及与血小板活性的关系。方法:（1）分别从我院体检人员中获取非糖尿病患者、糖尿病患者血小板,显微镜下观察细胞形态;Western Blot检测非糖尿病患者、糖尿病患者血小板中PHB及LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平;（2）从中心血站获取健康自愿者的浓缩血小板,对其进行离心洗涤,重悬培养;不同浓度（0,0.1,1,10mmol/l）H₂O₂处理正常血小板2小时后,用CCK-8法检测血小板的活力,活性氧检测试剂盒检测ROS（Reactive oxygen species）的表达水平,用Western Blot检测PHB、LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平,选择一个最适的H₂O₂浓度（1mmol/l）进行下一步实验;（3）用终浓度1mmol/l H₂O₂、4mmol/l 3MA（3-methyladenine,3-甲基腺嘌呤,自噬抑制剂）处理正常血小板,分为3组。对照组:纯血小板组;H₂O₂组:血小板+H₂O₂组;H₂O₂+自噬抑制组:血小板+H₂O₂+3MA组,用自噬阻滞剂3MA预处理血小板1h;再在处理组分别加入H₂O₂共培养2h。（4）用Western Blot和RT-PCR分别检测PHB、LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平及miR-27a的表达水平;用Annexin V-FITC/PE流式细胞术检测PAC-1的表达情况;用血小板功能分析仪检测血小板聚集率（Platelet aggregation rate,PAR）。结果:（1）血小板呈细小颗粒状悬浮生长,无细胞核。（2）糖尿病患者血小板中PHB和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量较非糖尿病组明显升高[（1.33±0.20）vs（0.15±0.02）,（0.14±0.12）vs（0.07±0.01）,p<0.01]。（3）不同浓度H₂O₂（0,0.1,1,10mmol/l）处理血小板2h后,1,10mmol/l浓度H₂O₂较对照组血小板活力下降[（88.45±2.72）%vs（100.00±0）%,p<0.05;（71.51±5.34）%vs（100.00±0）%,p<0.01],血小板ROS表达增多[（8.11±0.77）vs（0.12±0.01）,[（10.54±0.42）vs（0.12±0.01）,p<0.001];且0.1,1mmol/l浓度H2O2之间对血小板活力差异无统计学意义[（97.53±0.83）%vs（88.45±2.72）%,p>0.05],而1mmol/l较0.1mmol/l浓度H₂O₂ ROS表达升高（p<0.001）。（4）不同浓度H₂O₂（0,0.1,1,10mmol/l）处理血小板2h后,与正常对照组相比1,10mmol/l浓度H₂O₂可显著提高PHB的蛋白表达量[（0.68±0.05）vs（0.26±0.06）,p<0.001;（0.51±0.02）vs（0.26±0.06）,p<0.01],且1mmol/l较0.1mmol/l浓度H₂O₂ PHB表达显著升高（p<0.001）,并在10mmol/l时开始下降（p<0.05）。LC3II/LC3I的蛋白表达量较对照组均明显升高,并随浓度增加而增加[（3.05±0.76）vs（1.52±0.26）,p<0.05;（3.68±0.60）vs（1.52±0.26）,p<0.01;（6.40±0.50）vs（1.52±0.26）,p<0.001]。且1mmol/l较0.1mmol/l浓度H₂O₂ LC3Ⅱ/Ⅰ表达量差异无统计学意义（p>0.05）。（5）3MA预处理血小板细胞1h后与1mmol/l H₂O₂共培养2h;H₂O₂组较对照组PHB、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量明显升高[（0.50±0.03）vs（0.14±0.04）,p<0.01;（0.23±0.03）vs（0.05±0.02）,p<0.001],miR-27a下降[（0.43±0.26）vs（1.00±0）,p<0.05];而H₂O₂+3MA组较H₂O₂组PHB、LC3Ⅱ/Ⅰ明显下降[（0.31±0.04）vs（0.50±0.03）,（0.07±0.01）vs（0.23±0.03）,p<0.01],miR-27a升高[（0.97±0.36）vs（0.43±0.26）,p<0.05]。（6）3MA预处理血小板细胞1h后与1mmol/l H₂O₂共培养2h。H₂O₂组较对照组血小板PAC-1的表达量、PAR明显升高[（81.21±5.08）%vs（11.86±3.57）%,p<0.001;（52.07±5.69）%vs（28.87±2.82）%,p<0.01]H₂O₂+3MA组较H₂O₂组PAC-1的表达量、PAR下降[（61.43±5.25）%vs（81.21±5.08）%,p<0.05;（36.37±3.02）%vs（52.07±5.69）%,p<0.05]。结论:（1）糖尿病患者血小板基础自噬强于非糖尿病患者,且PHB参与此过程;（2）在离体状态下,H₂O₂导致的氧化应激可刺激血小板发生自噬,并促进血小板活化,miR-27a参与其中。