副产物缺失克雷伯肺炎杆菌中改善氧化还原平衡对1,3-丙二醇发酵的影响

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在利用克雷伯肺炎杆菌产1,3-丙二醇的过程中,2,3-丁二醇合成途径的阻断对于1,3-丙二醇工业化生产具有极其重要的意义。然而,2,3-丁二醇合成途径的阻断却会使细胞内氧化还原平衡被打破,引起细胞生长和1,3-丙二醇产量的大幅下降。因此,本文旨在研究在2,3-丁二醇缺陷菌株中,改善细胞中氧化还原平衡对1,3-丙二醇发酵的影响。  本文首先成功构建了重组表达载体yqhD-pUC-19、dhaT-pUC-19和dhaT-pETbu,并分别导入KG1-3(敲除2,3-丁二醇)和KG1-5(敲除2,3-丁二醇和乳酸)菌种,构建了6种菌株,KG1-3-CD,KG1-5-CD,KG1-3-CT,KG1-5CT,KG1-3-PT和KG1-5-PT。本文在此基础上通过补料分批发酵研究了后四种菌的氧化还原平衡的变化情况,并通过检测KG1-3-PT和KG1-5-PT的代谢产物的浓度,重点探究了乳酸对于氧化还原平衡的改善,菌体生长和产物合成的影响。  结果显示,导入表达载体dhaT-pUC-19的KG1-3-CD,KG1-5-CD发酵过程中的氧化还原平衡仍然被打破了,没有恢复正常水平。而导入表达载体dhaT-pETbu的两株菌种中,尽管KG1-3-PT的氧化还原平衡依然较高,而且最大菌浓和1,3-丙二醇的产量比KG1-3分别减小了4%和10%,但是KG1-5-PT的氧化还原平衡恢复到了正常水平,而且最大菌浓和1,3-丙二醇产量比KG1-5分别提高了6%和7%。结果表明,乳酸的积累会对细胞内氧化还原平衡的改善具有强抑制作用。
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