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目的多囊卵巢综合征(PCOS)是一种内分泌紊乱性疾病,影响着约10%育龄期妇女。生殖功能障碍是PCOS患者常见的临床表现。颗粒细胞在卵母细胞的发育和卵母细胞微环境的维持中起着重要的作用,而功能障碍则导致PCOS患者的卵泡发育异常。MiRNA是一段22-24个在进化上保守的核苷酸非编码RNA序列,可通过诱导靶基因的降解或结合到靶基因的3′非转录区域(UTRs)来降解/抑制靶基因的翻译。已有研究表明,miRNA的差异表达参与原始卵泡的形成、卵泡的招募和选择、卵泡的闭锁、卵丘-卵母细胞的相互作用和颗粒细胞。然而,其机制尚未完全清楚。本研究旨在利用基因芯片数据筛选PCOS卵巢颗粒细胞中差异表达的miRNA,并探讨这些miRNA在PCOS中的生物学功能及其调控机制,并通过临床数据分析其潜在的临床意义。方法1、本研究首先利用GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中基因芯片数据(GSE84376)筛选出与PCOS有关的差异miRNA。利用靶基因预测软件对这些差异miRNA进行靶基因的预测,并对其进行了功能富集分析。然后,利用STRING在线工具和Cytoscape软件通过构建蛋白互作网络(PPI)寻找关键基因,并进一步构建了miRNA-关键基因调控网络。最后,通过FunRich软件对差异表达miRNA靶基因潜在转录因子进行富集分析。2、收集临床数据和颗粒细胞,用RT-qPCR方法验证差异表达的miRNA,并分析miRNA与临床收集指标的相关性。结果:1、经基因芯片筛选,本研究共筛选出7个差异上调miRNA。差异miRNA靶基因功能富集分析,我们富集到与PCOS有关的生物学功能,包括“细胞对含氮化物的反应”(GO:1901699)、“血管发育”(GO:0001568)、“水解酶的正向调控”(GO:0051345)、“轴突导向”(hsa04360)、“钙离子转运”(GO:0051924),“氯离子跨膜转运”(GO:1902476)。通过PPI网络和miRNA关键基因调控网络构建,共32个靶基因被鉴定为关键基因,而且这些关键基因主要受hsa-miR-3135b、hsa-miR-1225-5p、hsa-miR-1587、hsa-miR-3188、hsa-miR-4433-3p、hsa-miR-4417的调控。在差异miRNA靶基因转录因子富集分析中,我们发现了10个最显著的转录因子,而且Sp1富集程度最高。2、卵巢颗粒细胞经RT-qPCR方法验证,6个miRNA存在上调,其中hsa-miR-3135b和hsa-miR-3188差异具有统计学意义(P<0.05)。其表达量与临床数据相关性分析结果显示,hsa-miR-3135b和获卵数呈正相关(r=0.450,P<0.001),与受精率、卵裂率呈负相关(分别为r=-0.280,P=0.016;r=-0.232,P=0.049)。结论:本研究首次利用生物信息学的方法筛选并证明hsa-miR-3135b在PCOS患者颗粒细胞中高表达,并且与获卵数、受精率、卵裂率相关,提示hsa-miR-3135b的异常表达可能影响卵母细胞的发育,为PCOS卵泡发育障碍研究提供了一定的理论依据。