【摘 要】
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胃黏膜是对胃具有保护作用的一层黏膜,它能够抵御多种因素对胃组织的损伤。近年来,因胃黏膜损伤引起的胃部疾病发病率逐年升高。因此,胃黏膜的完整性对胃病的发生和发展具有重要影响。胃溃疡是较为常见的一类消化性溃疡疾病,临床中胃溃疡的治疗手段以药物治疗为主,但存在疗效欠缺、患者依存性差等弊端,急需开发出效果良好且价格低廉的新型药物治疗或缓解胃溃疡。蛋清粉多肽是食源性多肽的一种,已有研究表明蛋清肽具有多种生物
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胃黏膜是对胃具有保护作用的一层黏膜,它能够抵御多种因素对胃组织的损伤。近年来,因胃黏膜损伤引起的胃部疾病发病率逐年升高。因此,胃黏膜的完整性对胃病的发生和发展具有重要影响。胃溃疡是较为常见的一类消化性溃疡疾病,临床中胃溃疡的治疗手段以药物治疗为主,但存在疗效欠缺、患者依存性差等弊端,急需开发出效果良好且价格低廉的新型药物治疗或缓解胃溃疡。蛋清粉多肽是食源性多肽的一种,已有研究表明蛋清肽具有多种生物学活性,但是其在促细胞迁移和胃溃疡创面愈合中的研究较少。本实验室前期已对蛋清粉进行分离纯化,并对其组份进行分析,得到一系列具有生物活性的蛋清粉多肽。在此基础上,本课题从体内、体外两方面出发,研究蛋清粉多肽对胃溃疡创面愈合的影响,并对其作用机制进一步探究。意图从营养治疗、药食同源的角度出发,以期为开发蛋清粉多肽作为药品能有效改善胃溃疡的病理状态提供科研依据。现主要研究内容和结论如下:随机挑选出九条蛋清粉多肽,然后通过Transwell迁移实验筛选能够促进胃黏膜上皮细胞GES-1迁移的多肽,结果表明VVRFD、FDKLPGF、DSTRTQIN能够有效地促进GES-1细胞迁移。随后,选用这三条多肽分别进行浓度梯度实验。结果证明,蛋清肽VVRFD和DSTRTQIN均可在一定浓度范围内促进GES-1细胞的迁移。划痕实验也进一步验证了VVRFD和DSTRTQIN对GES-1细胞迁移能力的影响。MTS实验表明,仅蛋清粉多肽VVRFD能够显著性的促进GES-1细胞增殖。之后,通过Western Blot实验分别研究VVRFD和DSTRTQIN促GES-1细胞迁移的作用机制,以及对影响GES-1细胞增殖的机制进行了简单研究。结果表明,两种多肽均能影响胞内蛋白Hsp90α的表达,并通过外泌体途径分泌Hsp90α到细胞外,随后激活细胞表面受体LRP-1后将促迁移信号传递至胞内,从而诱发细胞内迁移相关信号通路并促进细胞迁移。接下来,通过建立阿司匹林诱导的小鼠胃溃疡模型进一步研究蛋清粉多肽对胃溃疡创面的修复作用。考虑到在胃溃疡中上皮细胞的增殖和迁移均能对溃疡创面起到一定改善作用,因此选择蛋清粉多肽VVRFD用于后续研究。胃组织大体图片和病理切片结果表明,与模型组相比,使用VVRFD治疗后小鼠胃内出血点、炎症细胞浸润均减少,且较少上皮细胞脱落。随后,测定了小鼠血清中SOD和MDA含量变化,结果表明给予高剂量VVRFD组小鼠血清中SOD活力增加,MDA含量降低。这提示着VVRFD可能通过抗氧化作用减少溃疡创面的进一步加重和损伤。Western Blot结果表明,Hsp90α和LRP-1在溃疡愈合前期表达均有增加,但在愈合后期两种蛋白的表达不再发生明显改变,提示Hsp90α可能在溃疡愈合前期发挥着重要作用。本研究表明蛋清粉多肽VVRFD、DSTRTQIN对GES-1细胞具有促迁移活性,并证明其机制可能是通过影响Hsp90α—LRP-1—Akt相关信号通路,从而促进GES-1细胞迁移。其中VVRFD促GES-1细胞迁移活性更为显著,并能够在体外影响GES-1细胞的增殖、在体内加速溃疡创面的愈合并降低炎性反应,证明其机制可能是在溃疡愈合早期阶段,通过影响Hsp90α相关信号通路来促进溃疡创面的愈合。综上,表明蛋清肽在治疗胃溃疡方面具有潜在的应用价值,也为蛋清粉多肽成为新型治疗胃溃疡愈合药物提供数据基础。
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