全氟烷基磺酰氟与核酸及蛋白的相互作用研究

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全氟及多氟化合物是一类人工合成的性质非常稳定的化合物,该类化合物在自然环境中分布广泛。研究表明这类化合物具有多种人体毒性。该类化合物中,对全氟烷基磺酰氟类毒性的研究目前仍然较少。本课题以全氟辛基磺酰氟及其两个短链类似物为研究对象,研究其与核酸分子以及大分子蛋白的相互作用,为将来的进一步毒性研究打下基础。本文主要分为如下三个部分:1.采用电喷雾质谱对全氟烷基磺酰氟(PFASFs)与碱基、核苷、脱氧核苷、核苷酸的反应活性进行探究,对反应产物进行碰撞诱导解离,并对解离产物进行分析。结果表明,PFASFs与碱基、核苷、脱氧核苷和环腺苷酸均可发生反应,存在两种反应类型,一种是与伯胺发生磺酰化反应,另一种是与胞苷、尿苷的羟基发生成环反应。发现PFASFs与核苷酸之间的相互作用体现为非共价结合作用,并且通过计算得出PFASFs与双链核苷酸的亲和力强于其与单链核苷酸的亲和力。2.以吖啶橙(AO)作为荧光探针,运用荧光光谱法研究PFASFs与小牛胸腺DNA(ctDNA)的相互作用机制。在模拟生理条件下,PFASFs对AO-ctDNA产生荧光淬灭作用,淬灭常数KSV随温度升高而降低,淬灭模式为静态淬灭。全氟丁基磺酰氟、全氟己基磺酰氟和全氟辛基磺酰氟与AO-ctDNA的结合常数分别是3.3×10-3μM-1、3.8×10-3μM-1、3.77×10-3μM-1。PFASFs与双链DNA的淬灭作用大于其与单链DNA的淬灭作用。改变离子强度,荧光强度没有太大变化。PFASFs与ctDNA的相互作用模式为嵌入作用。3.采用电喷雾质谱分别研究PFASFs与细胞色素c、溶菌酶、肌红蛋白的相互作用机制。通过滴定实验测定了PFASFs与三种蛋白在不同摩尔浓度比时的解离常数。结果表明,在不同摩尔浓度比的条件下,PFASFs与细胞色素c、溶菌酶、肌红蛋白均能形成稳定的复合物,三种PFASFs-蛋白复合物的稳定性顺序随着蛋白的不同而有所差别。
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