斑马鱼体内抗氧化酶活性对水体重金属与有机污染的响应研究

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水体在人类生活中起着重要的作用,但水体也是多种污染的集中受体,它的安全,直接威胁着人类正常的生存。为了有效地利用生物标记物作为污染物暴露和毒性效应的早期预警指标,建立一种简单、快速、准确的水体污染监测预警体系,本论文以水生生物斑马鱼为研究对象,进行了污染物对抗氧化酶的剂量效应关系和相关酶类标志物的分离纯化研究。首先,用1/20、1/10、1/5半致死浓度的重金属(Cu、Cd、Zn、Pb)和有机溶剂(苯酚、双酚A)对斑马鱼进行暴露实验,以抗氧化酶:超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)作为生物标志物,研究了其活性与暴露浓度、时间的变化情况。其次,通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sephacel离子层析、羟基磷灰石层析、Phenarose Sepharose6-Fast Flow疏水层析等步骤,对斑马鱼体内的氨肽酶进行分离纯化。研究结果表明:生活于含低浓度Cu2+水体中的斑马鱼,SOD和CAT活性都随暴率时间的延长而增强,但随着浓度的增大,酶活性增强趋势减弱。并且当到达一定阈值时,酶活性将下降。在含Cd2+的水体中,SOD活性随时间的增长而减弱;而CAT活性在低浓度时增大,但当浓度增大时,其活性便呈现先减小再增大的趋势。在含Zn2+的水体中,SOD活性随时间的增长呈现先减小再增大的变化趋势,并且随着浓度的增大,上升趋势减弱;而CAT活性随时间的增长而呈现出先增大再减小的变化趋势。在含有Pb2+的水体中,SOD活性随时间的增长而增强,但随着浓度的增大,酶活性的增强趋势减弱。而CAT活性随时间的增长而呈现出先增大再减小的变化趋势,而且减小的趋势越来越明显。在含有苯酚的水体中,低浓度下,SOD和CAT的活性都随时间的增长而增强,并且随着浓度的增大,变化趋势也会变大。在含有双酚A的水体中,SOD的活性随着浓度的增大,时间的增长,先下降再上升。而CAT的活性,随时间的增长而增强,并且随着浓度的增大,变化趋势也会变小。分离纯化斑马鱼体内的蛋白质,可获得一种对抗生素敏感的氨肽酶。其纯化倍数为1247,回收率为35.4%;分子量约为98KDa。最适温度45℃,最适宜pH值7.5。对Leu-MCA的催化水解效率Kcat/Km=4.2×106M-1S-1,活化能80.5KJ·M-1抑制剂bestain、抗生素、金属螯合剂可很好抑制其活性。经肽质指纹图谱鉴定其是斑马鱼体内一种对抗生素敏感的氨肽酶。可作于污染水体的生物标志物。
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