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多糖的分子修饰和结构改造即利用糖残基上的羟基、羧基、氨基等基团运用化学方法进行修饰,对提高多糖的生物活性具有重要意义。修饰的方法有很多,如硫酸化、羧甲基化、硒化、甲基化、氧化、部分水解、磷酸酯化、双基团衍生化等。目前,研究最多的是多糖的硫酸化修饰。多糖经硫酸酯化修饰后富含SO42-,易与蛋白质的特定结构域结合,由此改变其构象并影响其功能,使其活性增强或改变其原有活性。目前对于硫酸酯化多糖抗病毒、抗肿瘤、抗艾滋病等研究较多,而对于防治心血管疾病方面却鲜有报道。本文以马尾松花粉（Pinus massoniana pollen）为原材料,经60%乙醇沉淀、Sevage法去蛋白后得到多糖（PPM60）,对其进行纯化,各组分多糖用氯磺酸-吡啶法进行硫酸酯化修饰,得硫酸酯化多糖（SPPM60）,研究PPM60纯化组分及其酯化多糖对大鼠动脉平滑肌细胞（VSMCs）内游离钙离子浓度的影响并探讨其对细胞钙离子浓度的可能调节机制,同时检测其对VSMCs增殖的影响,以探讨马尾松花粉多糖对心血管疾病防治的意义。实验具体分为五部分:一、马尾松花粉多糖的纯化马尾松花粉多糖（PPM60）经Sephacryl S-400HR层析后,最后得到四个组分,按洗脱体积大小即分子量大小依次命名为PPM60-A、PPM60-B、PPM60-C、PPM60-D。二、马尾松花粉多糖的硫酸酯化及鉴定采用氯磺酸-吡啶法对多糖纯化各组分进行硫酸酯化改性,得到硫酸酯化多糖SPPM60-A、SPPM60-B、SPPM60-C及SPPM60-D。用氯化钡-明胶比浊法鉴定硫酸根含量测定取代度。结果表明,得到的四种酯化多糖取代度分别为1.28、1.63、1.31、1.49。三、大鼠动脉平滑肌细胞的原代培养采用组织贴块与酶解两种方法原代培养大鼠动脉平滑肌细胞,成功摸索出较成熟的实验方法。经α-actin免疫组化分析鉴定其纯度,取4-10代细胞进行多糖活性的测定。四、各组分多糖及酯化多糖对大鼠VSMCs内游离钙离子浓度的影响钙离子荧光探针Fura 2/AM对平滑肌细胞进行负载后,采用双波长荧光分光光度计检测其胞内游离钙离子浓度,发现PPM60纯化的各组分及其酯化多糖均能显著降低钙离子浓度,其中PPM60-A酯化前后对[Ca2+]i影响差异最大。用PPM60-A及SPPM60-A分别作用VSMCs,检测其对高K+、去甲肾上腺素（NE）升高胞内钙浓度的影响。结果显示,PPM60-A及SPPM60-A均能抑制[Ca2+]i的升高。说明PPM60-A及SPPM60-A可能通过细胞膜上的电压依赖及受体操纵型钙通道来降低VSMCs[Ca2+]i。高K+预升高[Ca2+]i后,PPM60-A及SPPM60-A仍能在一定程度上降低胞内钙浓度。提示PPM60-A及SPPM60-A还可能通过增加钙库贮存或促进钙排出起到降低胞内钙浓度的作用。五、PPM60-A、SPPM60-A对VSMCs增殖的影响NE刺激VSMCs建立增殖模型,检测PPM60-A及SPPM60-A对VSMCs增殖的影响。结果表明作用24h、48h后PPM60-A、SPPM60-A均能表现出显著的抑制作用,且呈剂量依赖性。