【摘 要】
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本论文以不同地区采集的尾菜叶为材料,驯化、分离纯化获得乳酸发酵菌株,对其分类地位进行了鉴定,测定了供试菌株的生长特征及产酸性能,以筛选出适合尾菜青贮用的优良菌株。采用正交试验获得优良乳酸菌用于尾菜青贮的最佳配方,并对青贮阶段的发酵质量进行了动态分析,取得了以下结果:(1)从9种尾菜样品中驯化、分离、纯化获得57株乳酸菌,BOX-PCR分析了其遗传多样性,在74.6%的相似水平处,供试菌株分为6个遗
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本论文以不同地区采集的尾菜叶为材料,驯化、分离纯化获得乳酸发酵菌株,对其分类地位进行了鉴定,测定了供试菌株的生长特征及产酸性能,以筛选出适合尾菜青贮用的优良菌株。采用正交试验获得优良乳酸菌用于尾菜青贮的最佳配方,并对青贮阶段的发酵质量进行了动态分析,取得了以下结果:(1)从9种尾菜样品中驯化、分离、纯化获得57株乳酸菌,BOX-PCR分析了其遗传多样性,在74.6%的相似水平处,供试菌株分为6个遗传群。对13个代表菌株的16S r DNA序列系统发育分析表明,供试菌株分布于4个属:乳杆菌属(Lactobacillus)、肠球菌属(Enterococcus)、片球菌属(Pediococcus)和魏斯氏菌属(Weissella),其比例分别为38.6%,29.8%,28.1%和3.5%。(2)通过测定供试菌株的生长、产酸性能以及耐酸、耐高温及耐盐能力,筛选出了用于尾菜青贮的发酵剂。从生长及产酸速率来看,菌株SCR10产酸快,产酸量高;从生长温度范围看,菌株SCR10,SCR20,SCR45,SCR46,SCR47可在10℃-45℃范围生长,菌株SCR10在较高温度下仍具有较强的产酸能力;从生长初始p H看,所有菌株均能在p H3.0环境下生长,表明耐酸能力强;所有菌株均可在含6.0%Na Cl的MRS培养基上生长。从中筛选出了1株优良乳酸细菌,编号SCR10,与植物乳杆菌Lactobacillus plantarum NRRL B-14768T相似度达99.6%;该菌株37℃、培养36h的最大产酸值达181.5吉尔涅尔度。(3)采用四因素三水平正交试验L9(3~4),青贮饲料的理化特性(乳酸菌数量、好氧菌数量、氨态氮/全氮含量)为主要评价因子,获得了尾菜量,麸皮添加量,米糠添加量,乳酸菌接种量最佳组合处理配方,尾菜70%,麸皮10%,米糠20%,乳酸菌接种量1.0%。(4)按照最优配方进行尾菜青贮发酵,分别取第0 d、7 d、15 d、30 d和第60 d的样品,分析感官品质,发酵品质,微生物和化学成分等指标。结果表明,从感官上看,青贮饲料为黄绿色,香甜酒酸味浓;从微生物数量看,第15d以后青贮饲料的微生物数量逐渐趋于稳定;发酵至第60 d,青贮料好氧细菌数量从2.4×10~8cfu g-1降低到1.4×10~3cfu g-1,酵母菌的数量从2.3×10~5cfu g-1降低到1.5×10~2cfu g-1,霉菌与芽孢杆菌均未检出。至第60 d时,干物质变化差异不大;p H值、粗蛋白、可溶性碳水化合物、中性洗涤纤维及酸性洗涤纤维的含量显著降低(P<0.05),乳酸含量显著增加(P<0.05),未检出丙酸和丁酸;丙氨酸含量增加,赖氨酸含量保持不变,其余氨基酸含量均有所降低。(5)采用高通量测序技术分析了最优配方第0 d,7 d和第60 d样品细菌群落变化,结果表明,随发酵时间延长,各处理细菌多样性指数逐渐降低,从0 d到60 d,乳杆菌属(Lactobacillus)含量由0.09%-0.34%增加至84.1%-94.3%,葡萄球菌属(Staphylococcus)、短杆菌属(Brevibacterium)占比从10%降至0.6%。在第7 d样品中,未分类乳杆菌科(Unclassified Lactobacillaceae)的菌株比例由0.28%-0.46%增至了84.1%-94.3%,成为主导类群;至第60 d时,其丰度又降至3.2%-4.5%。整体而言,乳杆菌属(Lactobacillus)的丰度约为所有细菌种群的90%,占优势地位。
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