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精子在受精过程中需要有多种精子膜蛋白参与。这些蛋白一方面通过精子膜跨膜信号传导引起精子的顶体反应,另一方面,也为精子穿过透明带及精卵融合等提供必要的条件。同时,精浆作为射精后精子的生存环境,其组成成分与精子受精功能的相关性一直引人关注,特别是其中的一些蛋白分子通过与精子间相互作用,为精子后续的获能、顶体反应及受精提供了有力的保障。因此,对精子膜以及精浆中与受精相关蛋白的研究一直是生殖生物学和生殖医学研究领域的热点之一。
本研究运用蛋白质亲合层析、双向电泳和质谱分析等技术成功分离出人精子膜ConA结合蛋白,并鉴定了其中的一个ConA结合蛋白——人锌α2-糖蛋白(ZAG)。运用免疫荧光和免疫印迹等方法对精子膜ZAG蛋白的功能研究中发现:ZAG在顶体反应前、后精子上定位和含量都有很大的变化,精子顶体反应后精子膜ZAG水平显著下降。此外,发现兔抗人重组ZAG抗体可有效抑制精子顶体反应,并能阻止精子穿透去透明带仓鼠卵细胞的作用,其机制是通过降低精子胞内cAMP、PKA、PKC和Ca2+的水平予以实现。另一方面,最新研究发现,核糖核酸酶T2家族能通过与肌动蛋白(actin)结合可抑制肿瘤细胞的生长、迁移。而哺乳动物精子的运动、顶体反应与actin的功能密切相关。运用原核生物表达体系克隆表达了RNaseT2重组蛋白,并成功制备抗重组蛋白多克隆抗体。免疫荧光和免疫印迹实验结果显示:人精子和精浆中存在一定量的RNaseT2,主要定位于精子顶体区、颈部、尾部,并且与精子中肌动蛋白的定位有部分相似,尤其是在与精子动力相关的尾部,这些实验结果也为我们后续研究人精液中RNaseT2的生物学功能奠定了必要的基础。