亚临界丁烷萃取澳洲坚果油及脱脂粉多糖的纯化研究

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澳洲坚果作为热带特色果品,含油丰富,营养价值较高。目前,国内对于澳洲坚果主要以炒货鲜销为主,对于其油脂及副产品的深加工和理论研究较少。为进一步开发澳洲坚果油脂及其副产物加工技术,本文采用亚临界丁烷萃取法提取澳洲坚果油,并对澳洲坚果脱脂粉中的多糖进行提取、分离纯化及初步结构分析。首先,采用亚临界丁烷萃取技术提取其油脂,优化温度、时间、料液比、萃取次数等工艺参数,同时比较热榨法、冷榨法、正己烷萃取法对其主要理化指标及脂肪酸组成等品质指标的影响。其次,用热水提取澳洲坚果脱脂粉多糖,经分步醇沉后,以蛋白脱除率和多糖损失率为指标,通过比较Sevag法、TCA法、碱性蛋白酶法和碱性蛋白酶-Sevag联用法,对粗多糖进行脱蛋白研究,再利用DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换层析及Superdex 200凝胶过滤层析进一步纯化多糖。最后,通过紫外光谱扫描(UV)和高效液相凝胶渗透色谱法(HPGPC)检测多糖纯度及分子量,利用HPLC柱前衍生化法测定其单糖组成,并结合红外光谱(IR)和核磁共振(NMR)初步确定纯化多糖的结构特征。主要研究结果如下:(1)亚临界丁烷萃取澳洲坚果油的最佳工艺参数为:萃取温度35℃、压力0.3MPa、萃取时间15min、料液比1:5 g/m L、萃取4次,该条件下澳洲坚果油提取率可达80.7%。(2)亚临界丁烷萃取较热榨、冷榨、正己烷萃取更有优势,所制备的澳洲坚果油品质较好,可省去大部分精炼工序,脂肪酸组成以油酸(56.50%)和棕榈油酸(16.85%)为主,并含少量的棕榈酸(8.90%)和硬脂酸(3.97%)。(3)对于热水提取的澳洲坚果粗多糖,碱性蛋白酶-Sevag联用法为粗多糖脱蛋白的最佳方法,其最优条件为:酶用量1.0%(v/v)、酶解温度50℃、酶解时间3h,再经Sevag法处理1次,蛋白脱除率达92.3%,多糖损失率为39.9%。随后经DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换层析及Superdex 200凝胶过滤层析纯化得到澳洲坚果多糖纯品(MIPS2a),紫外光谱扫描表明该多糖不含核酸、蛋白质及色素等杂质。(4)纯多糖MIPS2a分子量为463.8k D,主要由鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸和阿拉伯糖约按0.32:0.29:0.83:0.80组成,IR和NMR分析表明MIPS2a具有一般多糖的特征,且其单糖组成与HPLC衍生化分析结果相吻合。
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