Mx（Myxovirus resistance）蛋白是一种十分重要的蛋白,是与抗病毒蛋白直接相关的蛋白。Ⅰ型干扰素有干扰素α和β两种,可诱导产生Mx抗病毒蛋白。组成Mx蛋白的三个结构域中,GED区域与抗病毒功能相关。Mx蛋白具有广谱抗病毒功能,能够抑制大多数的负链RNA病毒以及少量DNA病毒。白介素1（Interleukin1,IL-1）是最先发现的白细胞介素,主要由巨噬细胞、单核细胞、成纤维细胞和树突状细胞产生。IL-1主要分为IL-1α、IL-1β、IL-1Ra 3种类型。其中,IL-1β在免疫功能方面具有双面性。爬行动物作为变温动物,在产生免疫反应时十分复杂,免疫反应随环境温度而变化,其免疫相关蛋白有重要抗病毒功能。扬子鳄为我国一级重点保护野生动物,目前,野生扬子鳄的数量已经很少,人工繁殖的成功,人工种群数量已达15000条。但随着人工养殖扬子鳄数量逐渐增加,在人工养殖时可能会出现多种疾病,防控扬子鳄相关疾病的发生,对该物种保护具有非常重要的意义。本研究进行扬子鳄Mx和IL-1β基因克隆,以及生物信息学分析,进行原核表达和多克隆抗体制备,对Mx抗病毒效力进行分析验证,测定不同组织在不同时期扬子鳄IL-1β表达量,为后续研究奠定基础。扬子鳄Mx蛋白CDS序列于生物公司进行基因合成。于南京扬子鳄人工养殖场采其外周血液,提取其mRNA反转录为cDNA,经过PCR扩增得到扬子鳄IL-1β序列,将正确的序列连接至pMD-19T载体完成基因克隆。分析Mx和IL-1β生物信息学,分析显示,扬子鳄Mx和IL-1β片段大小为2286bp和801bp,分别编码761和266个氨基酸,蛋白分子量分别为87kDa和30kDa,等电点分别为6.77和5.15。同源性分析结果显示,扬子鳄与美国短吻鳄（Alligator mississippiensis）的Mx基因同源性最高,与红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）差异最大;扬子鳄与美国短吻鳄的IL-1β基因同源性最高,与鱼类中的鲈鱼（Lateolabraxjaponicus）差异最大。经进化树分析,扬子鳄Mx基因和两栖爬行动物遗传距离最近,与鱼类和哺乳动物遗传距离最远;扬子鳄IL-1β基因与美国短吻鳄为同一支,亲缘关系最近,与鸟类亲缘关系较为接近,与鱼类的亲缘关系最远。将成功构建的原核表达载体转入Rossatta感受态细胞中,探索蛋白表达的最佳条件,应用切胶纯化目的蛋白,并免疫小鼠制备多克隆抗体,测定效价。结果可知,鼠抗扬子鳄Mx多克隆抗体效价达1:204800,鼠抗扬子鳄IL-1β多克隆抗体效价1:51200,并具有良好免疫效果。应用293T细胞,对水疱性口炎病毒（VSV）的滴度进行测定。应用荧光载体pEGFP-N1构建真核表达载体,并转入Rossatta感受态细胞。通过3种不同的方法验证扬子鳄Mx蛋白的抗病毒功能,首先将VSV病毒接种于转染和未转染重组Mx质粒的PK15细胞观察其变化;其次应用RT-PCR方法分析扬子鳄Mx蛋白对于VSV转录水平的影响;最后进行过表达Mx蛋白对VSV子代病毒滴度的影响。结果显示,应用荧光显微镜,可以在细胞内观察到绿色荧光信号,可以证明Mx表达成功,并定位胞浆中。表达Mx蛋白的PK15细胞无变化。过表达扬子鳄Mx在24h时VSV-G基因的表达下调约10倍,48h时VSV-G基因的表达下调约40倍,均显著抑制了 VSV病毒mRNA的转录。过表达24h后的细胞接毒,VSV子代病毒滴度为TCID50=10-3.59/100 μ L,与正常情况下对比降低3个数量级。上述3个结果,均证明了扬子鳄Mx蛋白的抑制病毒功能。应用荧光定量PCR的方法测定和分析扬子鳄IL-1 β在不同组织以及不同时期的表达水平,选取6种组织血液、肺、心脏、小肠、肌肉、肝脏。IL-1 β表达量在血液中呈现最高,非冬眠期普遍比冬眠期表达量高。通过上述研究,初步探索了扬子鳄相关免疫蛋白的免疫功能,为在人工养殖时,防控扬子鳄疾病发生,及疾病防治提供技术指导和理论基础,也为进一步研究爬行动物相关蛋白的免疫功能做铺垫。同时通过扬子鳄相关免疫蛋白的免疫功能研究,可以将其与高等动物的免疫功能相互关联,从而建立更加强大的生物免疫功能网络系统。