棉花黄萎病菌引起的棉花黄萎病(Vercicillium wilt)是棉花生产上一种严重的真菌病害,在世界主要棉花产区都曾造成过严重的经济损失。我国属于产棉大国,多年以来一直受到黄萎病的困扰,在我国发现的致病菌为大丽轮枝菌(Verticillium dahlia)。目前,致病相关基因功能研究的最直接的方法是通过创建该基因的确是突变体,进一步观察突变体表型上的变化,进而推测该基因的功能。农杆菌介导(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation, ATMT)的遗传转化技术,以其特有的有点成为研究真菌与其寄主互作的有力工具。本研究利用ATMT技术,创建了大丽轮枝菌V-190的突变体,并对部分突变体进行了分析,具体结果如下:(1)本文对大丽轮枝菌V-190遗传转化的关键条件、因素和参数进行了摸索和优化,确定了最适筛选转化子的潮霉素浓度为50μg/mL,头孢噻肟钠与羧卞青霉素对农杆菌有效抑制的浓度为200/200μg/mL。确定了共培养最佳方式是将萌发的大丽轮枝菌分生孢子与农杆菌混合物25℃共培养于Fries培养基中,共培养的最佳时间为2d,从接种病斑上分离并萌发的分生孢子作为转化受体的转化效率最高。应用最适的转化条件,最终平均获得20~30个转化子/10~5分生孢子。(2)实验对所得的部分转化子进行了PCR验证。根据T-DNA上已知潮霉素基因序列设计引物进行PCR,检测结果发现所检测的转化子均含有目的潮霉素基因片段。(3)将所获得的转化子接种于PDA培养基上,25℃培养7~10d,观察其菌落形态和显微特征,获得了7株菌落形态发生变异的突变体(T-22, T-23, T-42, T-13, T-212, T-36, T-215)、1株生长速度减慢致病力降低的突变体(T-22),未发现孢子形态发生变化的突变体。