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目的:探究H1N1pdm09流感重症肺炎患者中病毒奥司他韦耐药突变的存在情况及H275Y突变对奥司他韦疗效的影响。方法:1.收集2017年12月至2018年3月浙江大学医学院附属第一医院实验室确认的H1N1pdm09流感患者临床信息及标本并分为重症肺炎组和无重症肺炎组,通过测序病毒的神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)基因筛查奥司他韦耐药位点。2.分离培养奥司他韦耐药突变的、部分无耐药突变的病毒以及H1N1pdm09流感病毒参考株A/California/04/2009,培养物进行NA活性实验和奥司他韦NA抑制实验,根据世界卫生组织的标准判定病毒体外耐药程度。3.将相同浓度的耐药病毒和参考株分别感染6周龄雌性Balb/c小鼠,同时给药奥司他韦。取感染后第2、4和6天的肺组织,分别检测其中病毒载量的变化,并对感染后第6天的肺组织进行HE染色观察。结果:1.共测定了H1N1pdm09流感43名重症肺炎患者和257名无重症肺炎患者的病毒NA基因,其中H275Y突变是两组患者中检出的唯一一种奥司他韦耐药突变,其在重症肺炎患者中检出6例(14.0%),在无重症肺炎患者中检出1例(0.4%),两组的检出率具有显著性差异(P<0.001)。2.根据NA活性实验的结果,分离培养的上述7株发生H275Y耐药突变的病毒中有3株因活性太低无法进行奥司他韦NA抑制实验。进一步,奥司他韦NA抑制实验显示,奥司他韦对发生H275Y耐药突变的病毒抑制性高度降低,对无耐药突变的病毒正常抑制。3.感染2天后H275Y耐药突变病毒在小鼠肺部的载量显著高于参考株(P=0.035),第4和6天后其和参考株在小鼠肺部的载量无统计学差异。HE染色结果显示,耐药突变病毒和参考株均可导致小鼠肺部出现肺泡壁增宽、炎症细胞浸润和细支气管上皮细胞坏死等病理改变。结论:1.病毒基因奥司他韦耐药突变在H1N1pdm09流感重症肺炎患者中出现的频率显著高于无重症肺炎患者。2.体外条件下奥司他韦对发生H275Y耐药突变的H1N1pdm09流感病毒的抑制性高度降低。3.发生H275Y耐药突变的H1N1pdm09病毒在体内会延缓奥司他韦的抗病毒疗效,也可表现出与敏感病毒类似的致病力。4.在H1N1pdm09流感重症肺炎的防治过程中应当关注病毒是否出现奥司他韦耐药。