CG5844在果蝇睾丸生殖干细胞微环境中的功能和机制研究

来源 :江苏大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:crp123
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:生殖干细胞(germline stem cells,GSCs)是成体干细胞(Adult Stem Cells,ASCs)的一种类型,其自我更新及分化潜能受到干细胞微环境和多种途径的严格调控。果蝇睾丸生殖干细胞为探讨干细胞自我更新与分化的调控网络提供了十分理想的研究模型。CG5844基因是从果蝇睾丸生殖干细胞微环境中筛选出的新的调控因子。然而,CG5844和干细胞微环境之间的潜在机制联系仍未确定。本课题主要针对CG5844基因在果蝇睾丸生殖干细胞微环境中的功能和机制问题进行研究和讨论。方法:(1)通过UAS/Gal4介导的RNAi途径,两种主要在干细胞微环境中表达的Gal4s(Nos-Gal4和Tj-Gal4)使CG5844的功能丧失,通过标记蛋白的免疫荧光染色检测并分析CG5844在果蝇睾丸干细胞微环境中的表型。(2)使用小干扰RNA(si RNA)在果蝇S2细胞中将CG5844表达沉默,通过磷酸化组蛋白H3(PH3)免疫荧光染色检测细胞增殖,TUNEL免疫荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡以及CCK-8法检测si RNA处理是否影响S2细胞的生长,以探索在体外CG5844的功能。(3)利用CG5844重组质粒转染S2细胞,使其在S2细胞中过表达。同样通过PH3及TUNEL免疫荧光染色、流式细胞术以及CCK-8法检测CG5844过表达对果蝇S2细胞增殖和凋亡的影响。(4)通过CG5844挽救实验进一步验证其表型。(5)通过液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS),鉴定CG5844结合蛋白,并进行生物信息学分析。(6)通过荧光定量PCR,检测与CG5844高度相关的结合蛋白与CG5844之间的关系。(7)运用果蝇UAS/GAL4系统,通过对质谱结果中所筛选的候选基因核糖体蛋白L6(Rp L6)进行细胞特异性敲减,通过免疫荧光分析Rp L6是否与CG5844具有相似的表型,从而进一步探究CG5844调控果蝇睾丸生殖干细胞微环境的调控机理。结果:(1)激光共聚焦显微镜成像结果显示,果蝇睾丸顶端存在特定缺陷。使用NosGal4使早期生殖细胞中的CG5844敲低,导致睾丸呈微小表型以及生殖细胞完全缺失。而Tj-Gal4介导的CG5844敲低,则导致正常包囊细胞功能障碍和未分化生殖细胞的积累,最终发展成睾丸肿瘤。(2)果蝇S2细胞中敲减CG5844导致细胞生长受到抑制。(3)CG5844过表达显著抑制了果蝇S2细胞的生长。(4)通过沉默CG5844基因所诱导的细胞增殖表型可以通过在S2的细胞中过表达CG5844来挽救,而凋亡表型却无法被挽救。(5)核糖体和核糖核蛋白复合体均为CG5844结合蛋白。且通过富集分析表明,CG5844以较高的可信度参与了核糖体信号转导途径。(6)荧光定量PCR实验结果显示CG5844调节剪接体和核糖体亚基的表达。(7)Rp L6 RNAi完全模仿果蝇睾丸GSCs中CG5844 RNAi所导致的自我更新和分化的相关表型。结论:果蝇体内实验表明CG5844基因是正常生殖细胞和包囊细胞形成和分化所必需的,CG5844的缺乏将导致生殖干细胞的自我更新和分化缺陷。而体外实验表明CG5844参与果蝇S2细胞增殖和凋亡稳态的调节,另外CG5844与核糖体复合物之间高度关联,且CG5844可调节剪接体和核糖体亚基的表达。通过同样的果蝇体内实验发现核糖体亚基Rp L6 RNAi完全模仿果蝇睾丸GSCs中CG5844RNAi所导致的自我更新和分化的相关表型。提示CG5844基因可能是通过与Rp L6相互作用来调控果蝇睾丸生殖干细胞的自我更新和分化。该研究有助于阐明生殖干细胞命运的调控机制,也为阐明生殖细胞肿瘤的形成机制提供新的思路。
其他文献
关联分析是数据挖掘中一种实用的技术,能够挖掘项集之间中令人感兴趣的规律或联系.然而随着现代社会的高速发展,其积累的数据的数据量也是庞大的,因此除了需要对计算机等硬件有更高的要求之外,对应的算法也应该得到改进.经典的Apriori算法的缺点是候选项集以及规则的数量随着事务数量的增加和事务最大宽度的增加等因素以指数级别的方式增加,其计算复杂度和时间复杂度也是急剧增加.而每一次计算候选k-项集的支持度计
为了确保模型的精确度,传统机器学习算法需要收集大量的原始数据进行模型训练.一方面,人们享受着高精度模型给生活带来的便利,例如图像处理,文字识别等,另一方面,人们也面临着数据的隐私泄漏问题,引起了人们的广泛关注.如何保证在不泄露用户隐私的情况下安全地进行回归模型训练,或根据已有模型进行安全预测成为当前机器学习中亟需解决的问题.针对如何不泄露用户隐私的情况下进行安全回归模型训练的回归学习问题,本文提出
目的:本研究以L5脊神经结扎(SNL)神经病理性疼痛的大鼠模型为研究对象,从行为学检测和分子生物学检测观察分析推拿对SNL大鼠的镇痛作用,以2型囊泡膜谷氨酸转运体(VGLUT2)在外
本论文主要考虑具有可乘白噪声扰动的非自治FitzHugh-Nagumo格点系统的随机指数吸引子的存在性以及具有可乘白噪声的非自治时滞FitzHugh-Nagumo格点系统随机吸引子的存在性、结构和稳定性.论文内容分为如下三章:第一章,先介绍问题的发展背景,再介绍本文的研究内容以及与本文相关的基本概念.第二章,考虑具有可乘白噪声扰动的非自治FitzHugh-Nagumo格点系统的随机指数吸引子的存在
袍栎(Quercus serrata Thunb.)是壳斗科(Fagaceae)栎属(Quercus)植物。栎属植物广泛分布在亚、欧、非、美四洲,我国有51种、14个变种和1个变型。在我国,栎属植物是重要的经济
大地电磁测深法是通过对地面电磁场的观测,来研究地下介质电阻率的规律的一种地球物理方法。该种方法在地球物理方法中非常重要,且应用广泛。本次研究采用EH-4连续电导率成像仪,采用独特的正交磁偶极可控源,因其具有快速、自动、多频率采集数据、现场实时成像,且在基岩区可探深度达1000米左右等优点,被广泛应用于地下岩土的电导率分层、基岩的埋深,地下水探测、咸淡水分界面的划分、金属矿/煤田等勘查、道路勘查等领
塔里木盆地古城地区奥陶系鹰山组目的层以致密碳酸盐岩为主要储层。储层埋深均在6000米以上,储层具有低孔、低渗、非均质性强的特征,储层分布异常复杂。针对研究区储层的地震岩石物理建模需要综合考虑孔隙结构和孔隙含流体特征等对地震波频散和衰减造成的影响。首先假设岩石的特征单元体为包含不同孔隙形状的线弹性固体,孔隙充填无粘性可压缩流体,基于“不排水”近似,考虑外力作用时孔隙流体和固体基质间的应力耦合作用,建
[目 的]探知精神分裂症缓解期患者认知功能损伤的程度;探知辅助使用盐酸丁螺环酮片对缓解期精神分裂症患者认知功能损伤的改善能力;为今后精神分裂症的诊断、治疗及预后评估
目的:通过观察视力、静态视野、视觉诱发电位(P-VEP)、视网膜神经纤维层光相干断层扫描(OCT)以及中医症候评分的变化,研究补精益视片对眼压控制稳定后青光眼患者视功能的保护
目的:比较同期放化疗与单纯放射治疗治疗食管鳞状细胞癌(esopha geal squamous cell carcinoma,ESCC)患者的生存获益。方法:回顾性分析2003年7月至2013年11月在河北医科大学