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社会人口老龄化加重,使老年疾病受到重视,神经退行性疾病严重影响患者正常生命活动,因此解决此类问题刻不容缓。天然产物类药物有不可替代的优势,其来源广泛,结构多样且安全性高,成为近年来药物发展的新重点。核桃(Juglans regia L)是胡桃科核桃属多年生落叶乔木,学名胡桃。在我国栽培历史悠久,华北、西北、西南、华中、华南和华东,新疆南部等22个省份均有大面积种植。核桃中含有丰富的油脂,蛋白质多种微量元素。其中含有的亚油酸、亚麻酸、油酸等的活性是近年研究较多的方面。大量文献实验结果显示,不饱和脂肪酸对降低胆固醇,延缓大脑神经的衰老和促进神经再生意义重大。核桃仁中除了油脂部分具有这样的活性,水溶性部分是否也有类似神经营养、神经保护活性是本论文研究的重点。将新鲜核桃去皮后打粉脱脂,脱脂粉加水超声提取后的水溶液旋蒸干重新用水溶解成2 g/mL溶液作为母液,用神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞系构建体外神经实验模型,以神经突触生长为评价指标,评价核桃水提物的神经营养作用。进而检测神经丝蛋白(NF160)的基因表达量和蛋白表达量是否上调。得到的主要结论如下:(1)核桃水提物稳定性实验显示,水提物在温度较高时会出现降解现象。水提物过0.22μm水系膜后分别放置于4℃、25℃和37℃温度下分别处理1d,2d,3d后用高效液相检测,之后用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对色谱峰经行分析,结果显示37℃放置1d后水提物中有物质出现明显降解现象,25℃中也有此类现象出现,但在4℃下放置3d并未出现明显降解情况。调节水提物pH为5.5、6.5、7.5、8.5分别处理1h后用液相检测,中药色谱指纹图谱相似度评价软件结果显示并未有明显差异,故认为没有明显降解出现。所以水提物建议存放于4℃以下温度,以保证样品不降解。(2)核桃未去皮脱脂粉水提物有明显细胞毒性,去皮核桃脱脂粉水提物没有明显细胞毒性。核桃未去皮脱脂水提物处理细胞24h后进行MTT实验,结果显示水提物终浓度在400μg/mL以上出现明显细胞毒性。而去皮后的核桃粉水提物MTT实验结果显示,水提物终浓度从0.128 mg/mL到2000 mg/mL之间没有明显细胞毒性。(3)核桃去皮脱脂水提物有促进SH-SY5Y细胞突触伸长的活性,且能够上调NF160基因的表达和蛋白的表达量。去皮水提物处理细胞1w后用荧光显微镜观察发现终浓度为5 mg/mL时细胞突触相对空白对照组有明显增长现象。水提物处理细胞24h后提取细胞RNA和蛋白进行荧光定量PCR和Westren blot实验结果显示在终浓度5mg/mL时NF160基因有明显上调现象,蛋白表达量也有显著提升。核桃水提物促进神经细胞突触伸长可能跟NF16基因的上调有关。(4)结合文献及标品确定水提物中有已知成分胞苷、尿苷、鸟苷和腺苷。4种物质细胞毒性实验结果显示腺苷终浓度在0.2μg/mL以上有细胞毒性,除此之外其他3种核苷并无明显细胞毒性。该4种核苷按原始比例混合后处理细胞,细胞毒性实验结果显示,并无明显毒性。4种核苷处理细胞1w后用显微镜观察发现胞苷、尿苷和鸟苷均有促进细胞突触增长的活性,分别在20μg/mL、2μg/mL、0.8μg/mL有最好活性,但从突触增长长度发现突触增长长度不及总体水提物增长长度。(5)水提物液相图谱37min有一峰面积较大的吸收峰,单独收集该峰后处理细胞,细胞毒性实验结果显示该峰终浓度从1μg/mL到1000μg/mL之间没有明显细胞毒性,且没有明显促进细胞突触增长的活性。