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目的:探讨大叶紫珠总黄酮(Total Flavonoids from Callicarpa macrophylla,TFCM)体外抗氧化活性以及对鱼藤酮(Rotenone,Rot)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的机制。方法:1. TFCM含量测定及体外抗氧化活性评价:(1)用NaNO2––Al(NO3)3–NaOH法测定TFCM含量。(2)以维生素C、BHT为对照,测定还原力,清除DPPH自由基、· OH自由基、O2-自由基及H2O2的能力来评估体外抗氧化能力。2. TFCM对鱼藤酮诱导SH-SY5Y细胞损伤的影响:将SH-SY5Y细胞分为正常组,模型组,TFCM低、中、高剂量组,TFCM低、中、高剂量组分别给予30、60、90mg/L剂量TFCM处理细胞,24h后与模型组同样用终浓度为20μM鱼藤酮作用24小时。用MTT法测定细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡率。3. TFCM对鱼藤酮诱导SH-SY5Y细胞损伤相关基因表达及SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影响:将SH-SY5Y细胞分为正常组,模型组,TFCM低、中、高剂量组,TFCM低、中、高剂量组分别给予30、60、90mg/L剂量TFCM处理细胞,24h后与模型组同样用终浓度为20μM鱼藤酮作用24小时。黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测细胞中SOD活力,硫代巴比妥酸法(TBA)测细胞中MDA含量,定量分析降低的谷胱甘肽与氧化的谷胱甘肽的比值来测定GSH-Px的活力,免疫荧光法及Western Blot法检测凋亡相关基因Mcl-2、Cleavedcaspase-3的表达。结果:1.(1)以芦丁作为标准对照,采用NaNO2––Al(NO3)3–NaOH法测得TFCM含量为81.19%。(2)体外抗氧化结果表明,在还原力测定试验中,还原力强弱顺序为TFCM<BHT≤维生素C。在DPPH清除体系中,DPPH清除能力强弱顺序为TFCM≤BHT<维生素C。在超氧阴离子清除体系中,超氧阴离子清除强弱顺序为TFCM<维生素C。在过氧化氢清除体系中,过氧化氢清除强弱顺序为TFCM<维生素C,但二者的清除能力无显著性差异。2. TFCM对Rot诱导SH-SY5Y损伤的影响:不同剂量鱼藤酮作用SH-SY5Y细胞24h后,MTT法测细胞存活率,显示1μM、5μM、10μM、15μM、20μM、25μM处理组的细胞存活率分别为(75.20±4.29)%、(67.20±8.43)%、(63.40±8.15)%、(58.30±5.94)%、(50.50±5.85)%、(39.00±2.69)%,与正常组相比,细胞存活率显著降低,具有统计学差异(P<0.01),故选择终浓度20μM鱼藤酮处理构建SH-SY5Y细胞损伤模型。将SH-SY5Y细胞给予TFCM(60、90mg/L)处理24h后,用终浓度为20μM鱼藤酮作用24h,MTT法检测细胞存活率结果显示,TFCM给药组(60、90mg/L)与模型组比较,其存活率明显增高,且有剂量依赖性(P<0.05);TUNEL法检测结果显示模型组TUNEL阳性细胞较多,凋亡率为(61.8±6.0)%,TFCM给药组(60、90mg/L)凋亡率分别为(28.2±8.0)%、(16.7±6.0)%,与模型组比较凋亡率显著降低(P<0.01),且均呈剂量依赖性。3. SOD、GSH-Px活性和MDA含量检测结果显示:与正常组比较,模型组SOD、GSH-PX活性明显降低,MDA含量明显上升,具有统计学意义(P<0.01);TFCM给药组(60、90mg/L)与模型组比较,SOD、GSH-Px活性明显升高,MDA含量明显下降(P<0.01或P<0.05),呈剂量依赖性。Western Blot法检测显示,与正常组比较,模型组Mcl-1蛋白表达明显下降, Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),具有统计学意义;与模型组比较,TFCM处理组(60、90mg/L)Mcl-1蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01), Cleaved caspase-3蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖性。免疫荧光法检测结果表明:正常组细胞核形态规则,Mcl-1在细胞核核膜上有明显表达,CC3表达较低;经鱼藤酮处理后的模型组,细胞核形态不规则,Mcl-1表达水平呈明显降低,CC3在细胞核中有明显表达,与模型组比较,TFCM给药组(60、90mg/L)的Mcl-1表达水平逐渐上升,CC3表达水平逐渐降低,呈剂量依赖性。结论:1. TFCM有一定的的体外抗氧化活性。2.在鱼藤酮诱导的细胞损伤模型中,TFCM增加损伤细胞存活率,降低细胞凋亡率,提示TFCM可抑制Rot诱导的SH-SY5Y细胞损伤。3. TFCM抑制鱼藤酮诱导SH-SY5Y细胞的损伤,其机制可能是与氧化应激及上调凋亡相关基因Mcl-1、下调Cleaved caspase-3的表达有关。