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本试验采用了胃蛋白酶、胃蛋白酶-胰酶制剂和胃蛋白酶-SIF三种体外法来测定12种绵羊的典型混合日粮的可利用真蛋白的消化率,将3种方法的结果进行比较,以胃蛋白酶-SIF为标准,探求3种方法之间的相关性,找出可以替代胃蛋白酶-SIF法来评定uTP在反刍动物后消化道的消化率的体外法。
本试验第一部分选用3头体重28.17±0.73kg带有瘤胃瘘管的健康成年杂交绵羊(小尾寒羊×北京本地羊)作为瘤胃液供体,供体外培养的日粮参照NRC(1975)成年绵羊饲养标准(体重45kg,日增重250g),配制出12种典型绵羊日粮。采用Zhao(2000)提供的方法进行短期人工瘤胃发酵,制备出人工瘤胃食糜,比较了经瘤胃发酵后12种混合日粮中TP和DM的变化。第二部分采用3种体外法评定人工瘤胃食糜中uTP的消化率,胃蛋白酶体外培养参照Tilley和Terry(1963)的方法进行,选取了24h、48h和72h三个时间点,分析比较了这三个时间点之间的相关关系;胃蛋白酶-胰酶制剂和胃蛋白酶-SIF体外培养以Akeson等(1964)的方法为基础,筛选了符合本实验室的最佳培养条件,最后分析比较了三种方法之间的相关关系。
试验结果表明:(1)经瘤胃液培养发酵后,12种混合日粮的DM含量显著降低,而蛋白含量少、品质较差的日粮经发酵后真蛋白含量显著提高。(2)胃蛋白酶体外培养的条件:每0.5g样品加入40m10.1M盐酸溶液(20g/L胃蛋白酶),在38℃水浴摇床中培养24、48、72h后取出,在1800xg下离心30min;胃蛋白酶一胰酶制剂体外培养条件:每0.5g样品用胃蛋白酶培养3个小时后,加入1M氢氧化钠溶液中和,在1800xg下离心30min,加入10ml胰酶制剂溶液(0.2MKH<,2>PO<,4>-0.2MNa<,2>HPO<,4> PH=7.6,4mg/ml胰酶制剂Sigma,P.7545)培养24h,取出后在2400xg下离心15min;胃蛋白酶-sif的培养条件同胃蛋白酶-胰酶制剂,SIF用量为每0.5g样品用0.09g SIF。(3)三种方法经相关分析后,发现胃蛋白酶三个时间点之间呈显著相关关系,回归公式如下:胃蛋白酶24h(x)和胃蛋白酶48h(y):y=1.03x-8.83(R<2>=0.85,n=12,p<0.01) 胃蛋白酶48h(x)和胃蛋白酶72h(y):y=0.96x+0.86(R<2>=0.96,n=12,p<0.01) 胃蛋白酶24h(x)和胃蛋白酶72h(y):y=0.98x-7.23(R<2>=0.81,n=12,p<0.01)但是,胃蛋白酶、胃蛋白酶-胰酶制剂和胃蛋白酶-SIF之间两两均不存在显著相关关系。