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布鲁氏菌病(简称布病)是布鲁氏菌引起的人畜共患病,全球流行,在我国属于二类传染病,给世界各国畜牧业及人类健康造成了严重的经济损失和危害。该病目前尚不能完全根治,人感染布鲁氏菌后会有轻重不一的发热、多汗、关节痛等症状。布病的诊断对治疗和预后起关键作用,早诊断早发现是治愈布病的一个关键步骤,研发一款能够适用于农牧区基层使用的快速诊断试剂盒是布病高发地区所需要的。目的:(1)提取布鲁氏菌S-2和S-19株中的脂多糖(LPS),检测该两种脂多糖的抗原性与诊断价值;(2)布鲁氏菌LPS抗原研发胶体金抗体检测试剂盒,确定其敏感性和特异性;(3)用该试剂盒对新疆不同地区的发热人群和社区人群进行初筛,确定其应用性,并评估这些地区布鲁氏菌病流行的严重性;(4)构建布鲁氏菌Omp2a表达载体,用大肠杆菌表达该蛋白,确定其诊断价值;方法:(1)收集工业化生产的布鲁氏菌疫苗株S-19与S-2株菌株液,用LPS纯化试剂盒通过裂解、纯化、洗涤的方法提取LPS,用提取的LPS进行斑点ELISA试验与布鲁氏菌病阳性、正常阴性、疱疹病、血吸虫病患者血清反应观察和记录反应颜色并判断诊断价值;(2)从新疆布病疫区收集139份通过虎红平板凝集试验(RBPT)与试管凝集试验(SAT)检测结果阳性的患者血清,用胶体金试剂盒对这些阳性血清进行测定,确定胶体金试剂盒的灵敏度;(3)从新疆布病疫区收集354份需要与布病做鉴别诊断的患者血清进行检测,确定胶体金试剂盒的特异度。利用前期确定所研发的胶体金快速诊断试剂盒对新疆8县(市)的发热病人和三县市的社区人群进行初步的应用。最后用SPSS2.0软件对三个疫区的阳性率进行卡方检验计算出三个地区间的差异;(4)外膜蛋白Omp2a的原核表达载体的构建,菌株BL21的转化,重组Omp2a经IPTG诱导、纯化后进行SDS-PAGE凝胶电泳观察目的蛋白的位置,经过斑点ELISA、Western Blotting判断Omp2a的抗原性及诊断价值;结果:(1)斑点ELISA试验结果显示从S-19与S-2株中提取的LPS与布鲁氏菌病阳性血清能起强的抗原抗体反应,与商品化LPS诊断试剂盒的反应一致,具有强的诊断价值;(2)对布病阳性血清及需要与布病做鉴别诊断的患者血清进行检测,菌胶体金试剂盒具有较高的灵敏度与特异度,灵敏度为100%、特异度为98.6%;(3)收集358份发热人群血清及329份体检人群血清,利用胶体金试剂盒进行检测该地区的布病阳性率。对新疆布病疫区的三个地区的发热人群的检测中得出,伊犁地区阳性率为19.3%、塔城地区阳性率为16.5%、巴州地区阳性率为19.3%,χ~2=0.267,p=0.875,三个地区之间无统计学差异。对新疆非布病疫区及布病疫区的社区体检人群的检测中得出疫区阳性率为6.9%,而非疫区阳性率为0%;(4)布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a的原核表达载体菌株BL21经PCR能扩增出亮度为均一的目的片段。Omp2a经过热诱导后进行纯化,分别进行SDS-PAGE凝胶电泳和斑点ELISA试验分析Omp2a蛋白在大肠杆菌中的表达,从SDS-PAGE上看经过热诱导和没有经过热诱导的同样出现了明显的表达条带。Western Blotting结果示大肠杆菌表达的Omp2a具有较好的诊断价值,能与布鲁氏菌病阳性血清反应。结论:(1)S-2与S-19株中提取的LPS能与布鲁氏菌病阳性血清起强的抗原抗体反应,具有较强的诊断价值;(2)布鲁氏菌LPS胶体金试剂盒具有很高的灵敏度与特异度、诊断价值高、反应速度快、操作方便、适合在基层上推广使用;(3)从统计学分析中能看出来,新疆塔城地区、伊犁地区、巴州地区农牧区的阳性率没有差异。属于高流行区,建议加强这些地区布鲁氏菌病的预防;(4)布鲁氏菌第二外膜蛋白Omp2a具有一定的免疫原性;