【摘 要】
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目的 探讨人参皂苷Rg3对中波紫外线(UVB)致体外培养人成纤维细胞光老化的影响.方法 体外培养人成纤维细胞,用UVB照射建立光老化模型.将细胞分为正常组、模型组、对照组和实验组.正常组给予37℃、5％CO2条件下常规培养;模型组给予UVB一次性照射,照射剂量为20 mJ·cm-2,照射时间为222.22 s;对照组给予含40μg·mL-1人参皂苷Rg3的培养基进行培养;实验组给予含40μg·mL-1人参皂苷Rg3的培养基培养,并用UVB一次性照射,剂量为20 mJ·cm-2.培养48 h后,用荧光探针法
【机 构】
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西南医科大学组织学与胚胎学教研室,四川泸州646000;四川卫生康复职业学院 护理系,四川 自贡633000;西南医科大学组织学与胚胎学教研室,四川泸州646000
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目的 探讨人参皂苷Rg3对中波紫外线(UVB)致体外培养人成纤维细胞光老化的影响.方法 体外培养人成纤维细胞,用UVB照射建立光老化模型.将细胞分为正常组、模型组、对照组和实验组.正常组给予37℃、5％CO2条件下常规培养;模型组给予UVB一次性照射,照射剂量为20 mJ·cm-2,照射时间为222.22 s;对照组给予含40μg·mL-1人参皂苷Rg3的培养基进行培养;实验组给予含40μg·mL-1人参皂苷Rg3的培养基培养,并用UVB一次性照射,剂量为20 mJ·cm-2.培养48 h后,用荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)水平,用流式细胞仪检测细胞周期,用实时荧光定量聚合酶链反应检测转录因子E2相关因子2(Nrf2)和超氧化物歧化酶(SOD)mRNA的表达水平.结果 正常组、模型组、对照组和实验组的ROS分别为22.42±3.26,48.38±4.79,19.52±3.42和32.72±4.74,G1/G0期百分比分别为(62.85±2.25)％,(70.67±1.92)％,(58.58±1.93)％ 和(60.30±2.31)％,S期分别为(15.27±1.03)％,(8.28±0.63)％,(18.52±1.28)％和(17.23±1.36)％,Nrf2 mRNA相对表达量分别为1.00±0,1.18±0.06,1.04±0.03和1.26±0.04,SOD mRNA相对表达量分别为1.00±0,1.21±0.05,1.33±0.06和1.34±0.08.模型组、对照组和实验组的上述指标与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 人参皂苷Rg3可以减轻UVB致体外培养人成纤维细胞光损伤,主要机制可能是通过Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1-转录因子E2相关因子2-抗氧化反应元件信号通路调控SOD产生,刺激细胞活性,清除ROS.
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目的 构建人琥珀酸受体1(SUCNR1)基因启动子荧光素酶报告基因重组表达载体并检测其活性.方法 以糖尿病患者基因组DNA为模板进行聚合酶链反应(PCR),经分子克隆法将SUCNR1基因启动子序列插入pGL3-Basic质粒,用菌落PCR、测序方法筛选和鉴定重组质粒.实验组-1,-2,-3组为分别转入pRL-TK质粒和不同序列的重组质粒(SNP1、SNP2、SNP3)的293T细胞,测定各组的荧光素酶活性(重组质粒荧光素酶活性与海肾素荧光素酶活性的比值),间接检测不同启动子序列的差异表达.结果 PCR反应
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