目的研究自噬基因Beclinl在宫颈癌细胞株HeLa中过表达对HeLa细胞体内外生长的影响。方法构建自噬基因Beclinl的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-Beclinl，转染HeLa细胞[pcDNA3．1（＋）．Beclinl组]，同时设空载体转染组[pcDNA3．1（＋）组]和空白对照组。采用荧光定量PCR和Westernblot法检测3组HeLa细胞中BeclinlmRNA和蛋白的表达变化，采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法检测3组HeLa细胞生长的变化，采用流式细胞术检测3组HeLa细胞的凋亡情况，采用单丹磺酰尸胺染色检测3组HeLa细胞的自噬情况。将3组HeLa细胞分别接种于裸鼠皮下，观察体内成瘤性和生长情况。结果pcDNA3．1（＋）-Beclinl组、pcDNA3．1（＋）组和空白对照组HeLa细胞中BeclinlmRNA的表达水平分别为994．718±468．764、0．570±0．121和0．736±0．251。pcDNA3．1（＋）-Beclinl组HeLa细胞中BeclinlmRNA的表达水平较pcDNA3．1（＋）组和空白对照组明显增高（P〈0．05），而pcDNA3．1（＋）组与空白对照组间的差异无统计学意义（P〉0．05）；3组HeLa细胞中Beclinl蛋白的表达情况与mRNA相似。pcDNA3．1（＋）-Beclinl组的自噬细胞率为10．9％，明显高于空白对照组和pcDNA3．I（＋）组（分别为2．5％和3．1％，P〈0．05）。pcDNA3．1（＋）-Beclinl组HeLa细胞的凋亡率为（28．2±2．3）％，明显高于peDNA3．1（＋）组和空白对照组[分别为（14．6±4．6）％和（11．2±3．0）％，P〈0．05]。Beclinl在HeLa细胞中过表达可抑制肿瘤细胞在体外的生长，抑制率为58．7％；并可使HeLa细胞在裸鼠体内成瘤时间延长，瘤体体积和重量明显小于pcDNA3．1（＋）组和HeLa组（P〈0．05），抑瘤率为52．2％。结论自噬基因Beclinl过表达可抑制HeLa细胞在体内外的增殖，促进细胞的自噬与凋亡，为宫颈癌基因治疗提供了新的选择途径。
自噬基因Beclinl对宫颈癌HeLa细胞生长影响的体内外研究
【摘 要】
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目的研究自噬基因Beclinl在宫颈癌细胞株HeLa中过表达对HeLa细胞体内外生长的影响。方法构建自噬基因Beclinl的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-Beclinl，转染HeLa细胞[pcDNA3．1（＋）．Beclinl组]，同时设空载体转染组[pcDNA3．1（＋）组]和空白对照组。采用荧光定量PCR和Westernblot法检测3组HeLa细胞中BeclinlmRNA和蛋白的表达变
【机 构】
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山西医科大学第一医院妇产科,太原030001,山西医科大学第一医院妇产科,太原030001,四川大学华西第二医院妇产科,昆明医学院第一附属医院妇产科
【发表日期】
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2011年33期
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