【摘 要】
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不同类型的亲和标签会影响酶的催化功能和酶学性质.近平滑假丝酵母Candida parapsilosis来源的(S)-羰基还原酶2 (S)-carbonyl reductase 2,SCR2)能催化2-羟基苯乙酮.文中在SCR2的N端添加不同类型的亲和标签,在大肠杆菌Escherichia coli中异源表达并纯化重组蛋白his6-SCR2、strep-SCR2和MBP-SCR2,研究了重组蛋白催化2-羟基苯乙酮的酶学性质.结果 表明,不同类型的亲和标签对SCR2的酶学性质有一定的影响.其中,不同类型的亲和
【机 构】
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江南大学生物工程学院酿造微生物与应用酶学实验室,江苏无锡214122
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不同类型的亲和标签会影响酶的催化功能和酶学性质.近平滑假丝酵母Candida parapsilosis来源的(S)-羰基还原酶2 (S)-carbonyl reductase 2,SCR2)能催化2-羟基苯乙酮.文中在SCR2的N端添加不同类型的亲和标签,在大肠杆菌Escherichia coli中异源表达并纯化重组蛋白his6-SCR2、strep-SCR2和MBP-SCR2,研究了重组蛋白催化2-羟基苯乙酮的酶学性质.结果 表明,不同类型的亲和标签对SCR2的酶学性质有一定的影响.其中,不同类型的亲和标签对重组蛋白稳定性影响较大:1)在pH 6.0、30℃条件下保温13 h后,重组蛋白his6-SCR2和strep-SCR2的剩余酶活力是无融合标签SCR2的90.0％-95.2％,而MBP-SCR2的剩余酶活力是无融合标签SCR2的1.25倍.2)MBP-SCR2在50℃的半衰期比strep-SCR2、his6-SCR2和无融合标签SCR2长26.6％--48.8％.3) MBP-SCR2在-80℃存储60 d后,其酶活动力学参数Kcat比his6-SCR2、strep-SCR2和无融合标签SCR2高1.25-1.45倍.根据三级结构分析推出重组蛋白MBP-SCR2中MBP的C末端的α螺旋具有稳定SCR2的N端无规则卷曲的作用,从而提高酶的稳定性.圆二色谱检测结果表明MBP标签对蛋白SCR2的二级结构有一定的影响,且解折叠温度(Tm)分析证明,MBP-SCR2的Tm比无融合标签SCR2提高近5℃.研究结果不仅为羰基还原酶家族增添了一种2-羟基苯乙酮的稳定高效催化剂MBP-SCR2,同时为其他短链醇脱氢酶的标签设计提供了借鉴和依据.
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